Affinity Chromatography - Antibodies Афинитет хроматография - антитела

Affinity Chromatography of Antibodies Афинитет хроматография на антитела

Purification of Antibody using Affinity Methods Пречистване на Antibody използване на афинитет Методи

Specific antibody can be isolated from an antiserum. Affinity Chromatography separates molecules on their differing affinities for a ligand. Специфични антитела могат да бъдат изолирани от antiserum. Афинитет хроматография отделя молекули на техните различни ориентация за лиганд.

This method exploits the specific binding of antibody to antigen held on a solid matrix. Antigen is bound covalently to small, chemically reactive beads, which are loaded into a column, and the antiserum is allowed to pass over the beads. Този метод използва специфичните Свързването на антитела към антигена, състояла се на солидна матрица. Covalently срещу е обвързана с малка, химически реактив мъниста, които са заредени в колона, както и antiserum е позволено да премине през мъниста. The specific antibodies bind, while all the other proteins in the serum, including the antibodies to other substances, can be washed away. Специфичните антитела обвързване, а всички други протеини в серума, включително и на антитела към други вещества, които могат да бъдат измити веднага.

The specific antibodies are then eluted, typically by lowering the pH to 2.5 or raising it to greater than 11. Antibodies bind stably under physiological conditions of salt concentration, temperature, and pH, but the binding is reversible as the bonds are noncovalent. Специфичните антитела след това се елуират, обикновено чрез намаляване на рН до 2,5 или до повишаване на по-голям от 11. Antibodies обвърже стабилно при физиологични условия на сол концентрация, температура и киселинност, но задължително е обратимо, тъй като облигациите са noncovalent.

Affinity chromatography can also be used to purify antigens from complex mixtures by using beads coated with specific antibody. Афинитет хроматография може да се използва и за очистване на антигени от сложни смеси чрез обшити с мъниста специфични антитела.

Affinity chromatography uses antigen-antibody binding to purify antigens or antibodies. To purify a specific antigen from a complex mixture of molecules, a monoclonal antibody is attached to an insoluble matrix, such as chromatography beads, and the mixture of molecules is passed over the matrix. Афинитет хроматография използва антиген-антитяло, задължителни за очистване на антигени или антитела. За очистване на специфичен антиген от сложна комбинация от молекули, моноклонално антитяло е приложен към една неразтворими матрица, като хроматография мъниста, както и смес от молекули е преминал през матрица .

The specific antibody binds the antigen of interest; other molecules are washed away. Специфичните антитела се свързва антигена на интереси; други молекули се измиват веднага.

Specific antigen is then eluted by altering the pH, which can usually disrupt antibody-antigen bonds. Специални антиген се елуират чрез промяна на рН, което може да наруши антиген-антитяло облигации.

Antibodies can be purified in the same way on beads coupled to antigen. Antibodies може да бъде пречистена по същия начин, по мъниста, съчетано с антигена.

афинитет хроматография на антитела