Phage Display Libraries for Antibody Technique and Theory Phage Покажи библиотеки за антитела, техниката и теорията

Phage Display Libraries for Antibody V-region Production Phage Покажи библиотеки за Antibody V-регион Производство

Phage Display Library - Antibody Production Phage Покажи библиотека - производство на антитела

This technique is used for producing antibody-like molecules. Gene segments encoding the antigen-binding variable of V domains of antibodies are fused to genes encoding the coat protein of a bacteriophage. Bacteriophage containing such gene fusions are used to infect bacteria, and the resulting phage particles have coats that express the antibody-like fusion protein, with the antigen-binding domain displayed on the outside of the bateriophage. Тази техника се използва за производство на антитела, като молекули. Джийн сегменти кодиране на антиген-обвързващ променлива на V домейни на антитела са сплави на гените кодиращи мундир на протеин от bacteriophage. Bacteriophage, съдържащи такива ген fusions са свикнали да зарази бактерии, както и в резултат phage частици са палта, които изразяват антитела, като синтез протеин, с антиген-обвързващ домейн екрана на външната страна на bateriophage.

A collection of recombinant phage, each displaying a different antigen-binding domain on its surface, is known as a phage display library. In much the same way that antibodies specific for a particular antigen can be isolated from a complex mixture by affinity chromatography, phage expressing antigen-binding domains specific for a particular antigen can be isolated by selecting the phage in the library for binding to that antigen. The phage particles that bind are recovered and used to infect fresh bacteria. Each phage isolated in this way will produce a monoclonal antigen-binding particle analogous to a monoclonal antibody. А събирането на рекомбинантен phage, като всеки показва различна антиген-обвързващ владение на нейната повърхност, е известен като phage дисплей библиотека. Почти по същия начин, че антитела, специфични за определен антиген могат да бъдат изолирани от сложна смес от афинитет хроматография, phage изразяване на антиген-специфични области задължителни за определен антиген могат да бъдат изолирани от избора на phage в библиотеката за задължителни в този антиген. phage на частиците, че името се възстановяват и се използват за да зарази прясно бактерии. Всяка phage изолирани по този начин ще се произвеждат моноклонално антиген-обвързващ частици, аналогични на моноклонално антитяло.

The genes encoding the antigen binding site, which are unique to each phage, can then be recovered from the phage DNA and used to construct genes for a complete antibody molecule by joining then to parts of immunoglobulin genes that encode the invariant parts of the an antibody. When these reconstructed antibody genes are introduced into a suitable host cell line, the transfected cells can secrete antibodies with all the desirable characteristics of monoclonal antibodies of the suitable host cell line. В гените кодиращи антиген задължителен сайт, които са уникални за всеки phage, могат да бъдат възстановени от phage ДНК и се използват за построяване на гени за пълен антитяло молекула, като се присъедините към това части на имуноглобулин гени, че encode на invariant части на антитяло . Реконструирани Когато тези антитела гени са въведени в подходящ домакин клетъчна линия, на transfected клетки могат да secrete антитела с всички желателно характеристики на моноклонални антитела на подходящи домакин клетъчна линия.

In much the same way that a collection of phage can display a wide variety of potential antigen-binding sites, the phage can also be engineered to display a wide variety of antigens; such a library is known as an antigen display library. In such cases, the antigen displayed are often short peptides encoded by chemically synthesized DNA sequences that have mixtures of all four nucleotides in some positions, so that all possible amino acids are incorporated. It is not usual for every position in a peptide to be allowed to vary in this way, since the number of variable positions, there are over 2 x 1010 possible sequences of eight amino acids. Почти по същия начин, че събирането на phage може да показва широк спектър от потенциални антигени-обвързващи сайтове, на phage също може да бъде изработен за показване на широка гама от антигени; такава библиотека е известен като един антиген дисплей библиотека. В такива случаи , Антигена на екрана често са къси пептиди, кодирани с химически синтезирани ДНК последователности, които са смеси от всичките четири nucleotides в някои позиции, така че всички възможни аминокиселини са включени. Тя не е обичайно за всяка позиция в пептид да бъде позволено да се различават в по този начин, тъй като броят на променливите позиции, има над 2 х 1010 възможни последователности от осем аминокиселини.