Affinity Chromatography - Antibodies Affinity Chromatography - Protilátky

Affinity Chromatography of Antibodies Affinity Chromatography protilátek

Purification of Antibody using Affinity Methods Čištění protilátek pomocí metody Affinity

Specific antibody can be isolated from an antiserum. Affinity Chromatography separates molecules on their differing affinities for a ligand. Specifické protilátky mohou být izolovány z antiséra. Affinity Chromatography odděluje molekuly na jejich rozdílné příslušnosti pro ligand.

This method exploits the specific binding of antibody to antigen held on a solid matrix. Antigen is bound covalently to small, chemically reactive beads, which are loaded into a column, and the antiserum is allowed to pass over the beads. Tato metoda využívá specifické vazby protilátky na antigen, která se konala v pevné matrici. Antigen je kovalentně vázané na malé, chemicky reaktivní korálky, které jsou uložené v sloupci, a antiséra je dovoleno přejít přes perličky. The specific antibodies bind, while all the other proteins in the serum, including the antibodies to other substances, can be washed away. Specifické protilátky váží, zatímco všechny ostatní bílkoviny v séru, včetně protilátek na jiné látky, může být smyje.

The specific antibodies are then eluted, typically by lowering the pH to 2.5 or raising it to greater than 11. Antibodies bind stably under physiological conditions of salt concentration, temperature, and pH, but the binding is reversible as the bonds are noncovalent. Specifických protilátek jsou potom vyluhován, typicky o snížení pH na 2,5 nebo zvýšení její větší než 11. Protilátky váží stabilně za fyziologických podmínek na koncentraci soli, teplota a pH, ale Vazba je reverzibilní jako jsou dluhopisy noncovalent.

Affinity chromatography can also be used to purify antigens from complex mixtures by using beads coated with specific antibody. Affinity chromatografie může být také použit k čištění antigeny z komplexní směsi pomocí korálků potažené specifické protilátky.

Affinity chromatography uses antigen-antibody binding to purify antigens or antibodies. To purify a specific antigen from a complex mixture of molecules, a monoclonal antibody is attached to an insoluble matrix, such as chromatography beads, and the mixture of molecules is passed over the matrix. Affinity chromatografie používá antigen-protilátka závazné pro čištění antigeny nebo protilátky. Čistit specifický antigen ze složité směsi molekul, což je monoklonální protilátka je připojeno k nerozpustné matice, například chromatografie korále, a směs molekul je přešel matrice .

The specific antibody binds the antigen of interest; other molecules are washed away. Specifické protilátky se váže na antigen zájmu; jiných molekul se smyje.

Specific antigen is then eluted by altering the pH, which can usually disrupt antibody-antigen bonds. Specifického antigenu je pak vyluhován změnou pH, což může narušit obvykle protilátka-antigen dluhopisů.

Antibodies can be purified in the same way on beads coupled to antigen. Protilátky mohou být vyčištěná se stejným způsobem na korálky vázanou na antigen.

afinitu chromatografie protilátky