ELISA Radioimmunoassay Technique and Theory ELISA radioimunoanalýza Technika a teorie

ELISA Radioimmunoassays ELISA Radioimmunoassays

Radioimmunoassay (RIA), and enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), and competitive inhibition assay. Radioimunoanalýza (RIA) a enzym-spojené immunosorbent assay (ELISA), a konkurenční inhibice rozboru.

Radioimmunoassay (RIA) and enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) are direct binding assays for antibody or antigen and both work on the same principle, but the means of detecting specific binding is different. Radioimmunoassays are commonly used to measure the levels of hormones in blood and tissue fluids, while ELISA assays are frequently used in viral diagnostics. For both these methods one needs a pure preparation of a known antigen or antibody, or both, in order to standardize the assay. This assay will be described with a sample of pure antibody, but the principle is similar if pure antigen is used instead. In RIA for an antigen, pure antibody against that antigen is radioactively labeled, usually with 125I; for the ELISA, an enzyme is linked chemically to the antibody. The unlabeled component, which in this case would be antigen, is attached to a solid support, such as the wells of a plastic multiwell plate, which will absorb a certain amount of any protein. Radioimunoanalýza (RIA), a enzym-spojené immunosorbent assay (ELISA) jsou přímými závazné testy na protilátky nebo antigen a oba pracují na stejném principu, ale prostředky na detekci specifických Vazba je odlišná. Radioimmunoassays se běžně používá k měření hladiny hormonů v krve a tkáňové tekutiny, zatímco ELISA testy jsou často používány v virové diagnostice. U obou těchto metod je třeba čistě příprava na známou antigenu nebo protilátky, nebo obojí, aby standardizaci testu. Tato zkouška bude popsáno, vzorek čistého protilátky, ale princip je podobný, pokud čistého antigenu se používá místo. V RIA pro antigen, čistý protilátky proti tomuto antigenu je radioaktivně označeny, obvykle s 125I; pro ELISA, což je enzym je spojen chemicky na protilátky. V unlabeled složka , Což v tomto případě by byla antigenu, se připojuje k pevné podpory, jako jsou studny na plastové multiwell desku, která bude absorbovat určitou částku všech bílkovin.

The labeled antibody is allowed to bind to the unlabeled antigen, under conditions where nonspecific absorption is blocked, and any unbound antibody and other proteins are washed away. Na označeném jako protilátka je umožněno, aby se váží na unlabeled antigenu, a to za podmínek, kdy nespecifický absorpce je blokován, a nevázaného žádné protilátky a další proteiny jsou smyje.

Antibody binding to RIA is measured directly in terms of the amount of radioactivity retained by the coated wells, whereas in Elisa, binding is detected by a reaction that converts a colorless substrate into a colored reaction product. The color change can be read directly in the reaction tray, making data collection very easy, and ELISA also avoids the hazards of radioactivity. This makes ELISA the preferred method for more direct binding assays. Protilátky navážou na RIA je měřena přímo, pokud jde o množství radioaktivity uchování v potažené studny, vzhledem k tomu, že v Elisa, vazba je detekována reakcí, které převádí barvy substrátu do barevné reakce výrobku. Změnit barvu lze číst přímo v reakce podnosu, aby se sběr údajů velmi jednoduché, a Elisa také vyhýbá nebezpečí radioaktivity. Tím ELISA upřednostňovanou metodou pro více přímých závazné testy.

Labeled anti-immunoglobulin anti-bodies can also be used in RIA or ELISA to detect binding of unlabeled antibody to unlabeled antigen-coated plates. In this case, the labeled anti-immunoglobulin antibody is used in what is termed a ‘second layer’. The use of a second layer also amplifies the signal, as at least two molecules of the labeled anti-immunoglobin antibody are able to bind to each unlabeled antibody. RIA and ELISA can also be carried out with unlabelled antibody stuck on the plates and labeled antigen added. Označená anti-imunoglobulinu anti-subjekty mohou být také použity v RIA nebo ELISA na detekci vázání unlabeled protilátky na antigen-unlabeled potažené desky. V tomto případě je označená anti-imunoglobulin protilátka se používá v jaké je považuje za 'Druhá vrstva'. Použití druhou vrstvu rovněž zesiluje signál, pokud alespoň dvě molekuly z označenou anti-immunoglobin protilátky jsou schopny vázat na každou unlabeled protilátky. RIA a ELISA může být provedena s neznačenou protilátky přilepená na talíře a označené antigenu dodal.

Figure: The principle of the enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) Obrázek: Princip enzymu spojené immunosorbent assay (ELISA)

elisa

To detect antigen A, purified antibody specific for antigen A is linked chemically to an enzyme. The samples to be tested are coated onto the surface of plastic wells to which they bind nonspecifically. Chcete-li zjistit antigen A, čištěná protilátka specifická pro antigen A je chemicky spojen s enzymem. Vzorky, které mají být zkoušeny, jsou potažené, na povrchu plastových studny, ke které se váží nonspecifically. Residual sticky sites on the plastic are blocked by adding irrelevant proteins (not shown). The labeled antibody is then added to the wells under conditions where non specific binding Zbytková lepkavá stránky na plastové jsou blokovány přidáním irelevantní bílkovin (není vidět). V označeném jako protilátka se pak přidá do jamek za podmínky, kdy ne konkrétní závazné