Phage Display Libraries for Antibody Technique and Theory Phage Zobraz Knihovny pro Antibody Technika a teorie

Phage Display Libraries for Antibody V-region Production Phage Zobraz Knihovny pro Antibody V-region Výroba

Phage Display Library - Antibody Production Phage Zobraz knihovna - Protilátka Výroba

This technique is used for producing antibody-like molecules. Gene segments encoding the antigen-binding variable of V domains of antibodies are fused to genes encoding the coat protein of a bacteriophage. Bacteriophage containing such gene fusions are used to infect bacteria, and the resulting phage particles have coats that express the antibody-like fusion protein, with the antigen-binding domain displayed on the outside of the bateriophage. Tato technika se používá pro produkci protilátky-jako molekuly. Genové segmenty kódování antigen-závazné variabilní V oblasti protilátek budou propojeny na geny kódující bílkovinu v sukni z bakteriofág. Bakteriofág obsahující tyto fúze genů jsou používány k infikovat bakteriemi, a z toho vyplývající bakteriofág částice mají povlaky, které vyjadřují protilátka-jako syntéza bílkovin, s antigenem-závazné domény zobrazené na vnější straně bateriophage.

A collection of recombinant phage, each displaying a different antigen-binding domain on its surface, is known as a phage display library. In much the same way that antibodies specific for a particular antigen can be isolated from a complex mixture by affinity chromatography, phage expressing antigen-binding domains specific for a particular antigen can be isolated by selecting the phage in the library for binding to that antigen. The phage particles that bind are recovered and used to infect fresh bacteria. Each phage isolated in this way will produce a monoclonal antigen-binding particle analogous to a monoclonal antibody. Sbírka rekombinantní bakteriofág, každý pro zobrazení různých antigenů-závazné domény na její povrch, je známý jako bakteriofág displej knihovny. Stejnou měrou, že protilátky specifické pro konkrétní antigen může být izolován od složité směsi afinitu chromatografie, bakteriofág vyjadřující antigen-specifické oblasti, závazné pro konkrétní antigen může být izolována výběrem bakteriofág v knihovně za závaznou pro tento antigen. V bakteriofág částic, které jsou závazné pro získána a použita k čerstvé infikovat bakteriemi. Každý bakteriofág izolovaných v tomto směru bude vyrábět monoklonální Vazba antigen-částic, podobně jako monoklonální protilátky.

The genes encoding the antigen binding site, which are unique to each phage, can then be recovered from the phage DNA and used to construct genes for a complete antibody molecule by joining then to parts of immunoglobulin genes that encode the invariant parts of the an antibody. When these reconstructed antibody genes are introduced into a suitable host cell line, the transfected cells can secrete antibodies with all the desirable characteristics of monoclonal antibodies of the suitable host cell line. Genech kódování antigen závazné stránky, které jsou jedinečné pro každou bakteriofág, pak mohou být pokryty z bakteriofág DNA a použity k výstavbě geny pro úplnou molekulu protilátky se zapojit do té části imunoglobulinu genů, které enkódování invariantní dílů z Protilátka . Při těchto rekonstruovaných protilátky geny jsou zařazeny do vhodné hostitelské buňky line, transfected buňky mohou vylučovat protilátky se všechny žádoucí vlastnosti monoklonálních protilátek na vhodnou hostitelskou buňku řádku.

In much the same way that a collection of phage can display a wide variety of potential antigen-binding sites, the phage can also be engineered to display a wide variety of antigens; such a library is known as an antigen display library. In such cases, the antigen displayed are often short peptides encoded by chemically synthesized DNA sequences that have mixtures of all four nucleotides in some positions, so that all possible amino acids are incorporated. It is not usual for every position in a peptide to be allowed to vary in this way, since the number of variable positions, there are over 2 x 1010 possible sequences of eight amino acids. Stejnou měrou, že sbírka bakteriofág může zobrazovat celou řadu potenciálních antigen-vazebných míst, je bakteriofág může být také inženýrství na displeji širokou škálu antigenů; takové knihovny je znám jako antigen displej knihovny. V takových případech , Antigen zobrazeny jsou často krátké peptidy kódovány pomocí chemicky syntetizovaných DNA sekvence, které jsou směsí všech čtyř nukleotidů v některých pozicích, takže všechny možné aminokyseliny jsou vzaty v potaz. Není obvyklé pro každé místo v peptid má být umožněno, aby se v tímto způsobem, protože počet míst variabilní, existuje více než 2 x 1010 možných sekvencí osmi aminokyselin.