Affinity Chromatography - Antibodies Affinity chromatography - Antistoffer

Affinity Chromatography of Antibodies Affinity chromatography af antistoffer

Purification of Antibody using Affinity Methods Rensning af antistof ved hjælp Affinity Metoder

Specific antibody can be isolated from an antiserum. Affinity Chromatography separates molecules on their differing affinities for a ligand. Specifikt antistof kan isoleres fra en antiserum. Affinity chromatography adskiller molekyler på deres forskellige tilhørsforhold til en ligand.

This method exploits the specific binding of antibody to antigen held on a solid matrix. Antigen is bound covalently to small, chemically reactive beads, which are loaded into a column, and the antiserum is allowed to pass over the beads. Denne metode udnytter den specifikke binding af antistof mod antigen holdes på et solidt matrix. Antigen er bundet covalently til små, kemisk reaktive perler, som er indlæst i en kolonne, og antiserum får lov til at passere i løbet af de perler. The specific antibodies bind, while all the other proteins in the serum, including the antibodies to other substances, can be washed away. De specifikke antistoffer binder, mens alle de andre proteiner i serum, herunder antistoffer mod andre stoffer, kan blive vasket væk.

The specific antibodies are then eluted, typically by lowering the pH to 2.5 or raising it to greater than 11. Antibodies bind stably under physiological conditions of salt concentration, temperature, and pH, but the binding is reversible as the bonds are noncovalent. De specifikke antistoffer er derefter elueres, typisk ved at sænke pH til 2,5 eller hæve det til mere end 11. Antistoffer binder stabilt under fysiologiske tilstande af salt koncentration, temperatur og pH, men bindingen er reversibel som obligationer er noncovalent.

Affinity chromatography can also be used to purify antigens from complex mixtures by using beads coated with specific antibody. Affinity chromatography kan også bruges til at rense antigener fra komplekse blandinger ved hjælp af perler belagt med specifikke antistof.

Affinity chromatography uses antigen-antibody binding to purify antigens or antibodies. To purify a specific antigen from a complex mixture of molecules, a monoclonal antibody is attached to an insoluble matrix, such as chromatography beads, and the mixture of molecules is passed over the matrix. Affinity chromatography bruger antigen-antistof binding til rense-antigener eller antistoffer. Til at rense en specifik antigen fra en kompleks blanding af molekyler, et monoklonalt antistof er knyttet til en uopløselig matrix, såsom kromatografi perler, og blandingen af molekyler, som føres hen over den matrix .

The specific antibody binds the antigen of interest; other molecules are washed away. De specifikke antistof binder antigenet interessekonflikt andre molekyler er vasket væk.

Specific antigen is then eluted by altering the pH, which can usually disrupt antibody-antigen bonds. Særlige antigen derefter elueres ved at ændre pH, som normalt kan forstyrre antistof-antigen-obligationer.

Antibodies can be purified in the same way on beads coupled to antigen. Antistoffer kan blive renset på samme måde på perler koblet til antigen.

affinitet kromatografi antistof