ELISA Radioimmunoassay Technique and Theory ELISA Radioimmunoassay teknik og Teori

ELISA Radioimmunoassays ELISA Radioimmunoassays

Radioimmunoassay (RIA), and enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), and competitive inhibition assay. Radioimmunoassay (RIA) og enzym-linked immunosorbent assay (ELISA), og konkurrencedygtigt inhiberingsassay.

Radioimmunoassay (RIA) and enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) are direct binding assays for antibody or antigen and both work on the same principle, but the means of detecting specific binding is different. Radioimmunoassays are commonly used to measure the levels of hormones in blood and tissue fluids, while ELISA assays are frequently used in viral diagnostics. For both these methods one needs a pure preparation of a known antigen or antibody, or both, in order to standardize the assay. This assay will be described with a sample of pure antibody, but the principle is similar if pure antigen is used instead. In RIA for an antigen, pure antibody against that antigen is radioactively labeled, usually with 125I; for the ELISA, an enzyme is linked chemically to the antibody. The unlabeled component, which in this case would be antigen, is attached to a solid support, such as the wells of a plastic multiwell plate, which will absorb a certain amount of any protein. Radioimmunoassay (RIA) og enzym-linked immunosorbent assay (ELISA) er direkte bindende assays for antistoffer eller antigener og både arbejde på det samme princip, men midlerne til at afsløre specifikke binding er anderledes. Radioimmunoassays er almindeligt anvendt til at måle niveauet af hormoner i blod og væv væsker, mens ELISA assays der ofte bruges i viral diagnostik. For begge disse metoder en behov for en ren forberedelse af et kendt antigen eller antistof, eller begge, med henblik på at standardisere analysen. Denne analyse vil blive beskrevet med en stikprøve af ren antistof, men princippet er det samme, hvis rene antigen bruges i stedet. På RIA for et antigen, ren antistof mod dette antigen er radioaktivt mærket, sædvanligvis med 125I; for ELISA, et enzym er knyttet kemisk til antistof. etiket komponent , Som i dette tilfælde ville være antigen, er knyttet til en solid støtte, såsom brønde af en plastik mangehullede plade, som vil absorbere en vis mængde protein.

The labeled antibody is allowed to bind to the unlabeled antigen, under conditions where nonspecific absorption is blocked, and any unbound antibody and other proteins are washed away. De er mærket antistof er tilladt at binde sig til den etiket-antigen, under forhold hvor nonspecific absorption er blokeret, og enhver ubundet antistof og andre proteiner er vasket væk.

Antibody binding to RIA is measured directly in terms of the amount of radioactivity retained by the coated wells, whereas in Elisa, binding is detected by a reaction that converts a colorless substrate into a colored reaction product. The color change can be read directly in the reaction tray, making data collection very easy, and ELISA also avoids the hazards of radioactivity. This makes ELISA the preferred method for more direct binding assays. Antibody binding til RIA måles direkte i form af mængden af radioaktivitet beholdes af den coatede brønde, mens det i Elisa, bindende påvises ved en reaktion, der konverterer en farveløs substrat til et farvet reaktionsprodukt. Farveændring kan aflæses direkte i reaktion bakken, hvilket gør dataindsamlingen meget let, og Elisa undgår man også risikoen for radioaktivitet. Dette gør ELISA den foretrukne metode til mere direkte bindende assays.

Labeled anti-immunoglobulin anti-bodies can also be used in RIA or ELISA to detect binding of unlabeled antibody to unlabeled antigen-coated plates. In this case, the labeled anti-immunoglobulin antibody is used in what is termed a ‘second layer’. The use of a second layer also amplifies the signal, as at least two molecules of the labeled anti-immunoglobin antibody are able to bind to each unlabeled antibody. RIA and ELISA can also be carried out with unlabelled antibody stuck on the plates and labeled antigen added. Etiketten anti-immunglobulin anti-organer kan også bruges i RIA eller ELISA til påvisning af binding af etiket antistof mod etiket antigen-coatede plader. I dette tilfælde er stemplet anti-immunglobulin antistof er anvendt i, hvad der betegnes som en "andet lag". Brugen af et andet lag også forstærker signalet, som mindst to molekyler af mærket anti-immunoglobin antistof er i stand til at binde sig til hver etiket antistof. RIA og ELISA kan også gennemføres med umærkede antistof i stå på skilte og mærket antigen tilføjet.

Figure: The principle of the enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) Figur: Princippet om enzymet linked immunosorbent assay (ELISA)

elisa

To detect antigen A, purified antibody specific for antigen A is linked chemically to an enzyme. The samples to be tested are coated onto the surface of plastic wells to which they bind nonspecifically. At påvise antigen A, renset antistof specifikt for det antigen A er forbundet kemisk til et enzym. Prøverne, der skal testes er belagt på overfladen af plast brønde, som de binder nonspecifically. Residual sticky sites on the plastic are blocked by adding irrelevant proteins (not shown). The labeled antibody is then added to the wells under conditions where non specific binding Restolier klæbrig websteder på plast er blokeret ved at tilføje irrelevante proteiner (er ikke vist). Mærket antistof er derefter tilsættes til brøndene under forhold, hvor ikke specifik binding