Phage Display Libraries for Antibody Technique and Theory Fag Display Biblioteker for antistoffer teknik og Teori

Phage Display Libraries for Antibody V-region Production Fag Display Biblioteker for antistoffer V-region Produktion

Phage Display Library - Antibody Production Fag Display Bibliotek - Antibody Production

This technique is used for producing antibody-like molecules. Gene segments encoding the antigen-binding variable of V domains of antibodies are fused to genes encoding the coat protein of a bacteriophage. Bacteriophage containing such gene fusions are used to infect bacteria, and the resulting phage particles have coats that express the antibody-like fusion protein, with the antigen-binding domain displayed on the outside of the bateriophage. Denne teknik bruges til at producere antistof-lignende molekyler. Gene segmenter kodning det antigen-bindende variabel for V domæner af antistoffer er smeltet til gener koder for den coat protein af en bakteriofag. Bakteriofag, hvori sådanne gen fusions bruges til at inficere bakterier, og den resulterende fag partikler har frakker at udtrykke antistof-lignende fusion protein, med antigen-bindende domæne vises på ydersiden af bateriophage.

A collection of recombinant phage, each displaying a different antigen-binding domain on its surface, is known as a phage display library. In much the same way that antibodies specific for a particular antigen can be isolated from a complex mixture by affinity chromatography, phage expressing antigen-binding domains specific for a particular antigen can be isolated by selecting the phage in the library for binding to that antigen. The phage particles that bind are recovered and used to infect fresh bacteria. Each phage isolated in this way will produce a monoclonal antigen-binding particle analogous to a monoclonal antibody. En samling af rekombinant fag, der hver viser et andet antigen-bindende domæne på dens overflade, er kendt som et fag display bibliotek. På samme måde, at antistoffer er specifikke for et bestemt antigen kan isoleres fra en kompleks blanding af affinitet kromatografi fag udtrykker antigen-bindende domæner specifikke for et bestemt antigen kan isoleres ved at vælge fag på biblioteket for at binde sig til at antigen. fag partikler, der binder inddrives og bruges til at inficere fersk bakterier. Hvert fag isoleret på denne måde vil udarbejde et monoklonalt antigen-bindende partikelstørrelse analog med et monoklonalt antistof.

The genes encoding the antigen binding site, which are unique to each phage, can then be recovered from the phage DNA and used to construct genes for a complete antibody molecule by joining then to parts of immunoglobulin genes that encode the invariant parts of the an antibody. When these reconstructed antibody genes are introduced into a suitable host cell line, the transfected cells can secrete antibodies with all the desirable characteristics of monoclonal antibodies of the suitable host cell line. De gener, der koder for den antigen bindende site, som er unikke for hvert fag, kan derefter blive tilbagebetalt af fag DNA og bruges til at konstruere gener for en komplet antistof molekyle ved at slutte sig derefter til dele af immunglobulin gener, der koder invariant dele af et antistof . Når disse rekonstruerede antistof gener er indført i et egnet vært cellelinje, transfected celler kan udskille antistoffer med alle de ønskede egenskaber af monoklonale antistoffer af passende vært cellelinje.

In much the same way that a collection of phage can display a wide variety of potential antigen-binding sites, the phage can also be engineered to display a wide variety of antigens; such a library is known as an antigen display library. In such cases, the antigen displayed are often short peptides encoded by chemically synthesized DNA sequences that have mixtures of all four nucleotides in some positions, so that all possible amino acids are incorporated. It is not usual for every position in a peptide to be allowed to vary in this way, since the number of variable positions, there are over 2 x 1010 possible sequences of eight amino acids. I langt de samme måde, at en samling af fag kan vise en bred vifte af potentielle antigen-bindende sites, fag kan også blive manipuleret til at vise en bred vifte af antigener; sådan et bibliotek, der kaldes et antigen display bibliotek. I sådanne tilfælde , Antigenet vises ofte er korte peptider kodet ved kemisk syntese DNA-sekvenser, som er blandinger af alle fire nukleotider i nogle holdninger, således at alle mulige aminosyrer er indarbejdet. Det er ikke sædvanligt for hver position i et peptid at få lov til at variere i denne måde, da antallet af variable positioner, der er over 2 x 1010 mulige sekvenser af otte aminosyrer.