Affinität Chromatographie - Antikörper

Affinität Chromatographie der Antikörper

Reinigung des Antikörpers mit Affinität Methoden

Spezifischer Antikörper kann von einem Antiserum lokalisiert werden. Affinität Chromatographie trennt Moleküle auf ihren unterscheidenen Affinitäten für ein ligand.

Diese Methode nutzt die spezifische Schwergängigkeit des Antikörpers zum Antigen aus, das auf einer festen Matrix angehalten wird. Antigen wird kovalent zu den kleinen, chemisch reagierenden Kornen gesprungen, die in eine Spalte geladen werden, und das Antiserum wird über die Korne überschreiten lassen. Die spezifischen Antikörper binden, während alle anderen Proteine im Serum, einschließlich die Antikörper zu anderen Substanzen, weg gewaschen werden können.

Die spezifischen Antikörper werden dann, gewöhnlich eluiert, indem man den pH bis 2.5 senkt oder ihn bis grösser als 11 aufwirft. Antikörper binden beständig unter physiologischen Bedingungen der Salzkonzentration, -temperatur und -pH, aber die Schwergängigkeit ist, die Bindungen noncovalent so umschaltbar auch sind.

Affinität Chromatographie kann auch verwendet werden, um Antigene von den komplizierten Mischungen zu reinigen, indem man die Korne verwendet, die mit spezifischem Antikörper beschichtet werden.

Affinität Chromatographie benutzt Antigen-Antikörper Schwergängigkeit, um Antigene oder Antikörper zu reinigen. Um ein spezifisches Antigen von einer komplizierten Mischung der Moleküle zu reinigen, wird ein monoclonal Antikörper zu einer unlöslichen Matrix, wie Chromatographie bördelt angebracht, und die Mischung der Moleküle wird über die Matrix geführt.

Der spezifische Antikörper bindet das Antigen des Interesses; andere Moleküle werden weg gewaschen.

Spezifisches Antigen wird dann eluiert, indem man den pH ändert, der Antikörper-Antigen Bindungen normalerweise stören kann.

Antikörper können in der gleichen Methode auf den Kornen gereinigt werden, die zum Antigen verbunden werden.

Affinität Chromatographieantikörper