ELISA Radioimmunoprobe-Technik und Theorie

ELISA Radioimmunoproben

Radioimmunoprobe (RIA) und Enzym-gebundene Immunosorbentprobe (ELISA) und konkurrierende Hemmungprobe.

Radioimmunoprobe (RIA) und Enzym-gebundene Immunosorbentprobe (ELISA) sind direkte verbindliche Proben für Antikörper oder Antigen und beide arbeiten auf der gleichen Grundregel, aber die Mittel des Entdeckens der spezifischen Schwergängigkeit ist unterschiedlich. Radioimmunoproben werden geläufig verwendet, um die Stufen der Hormone im Blut und in den Gewebeflüssigkeiten zu messen, während ELISA Proben häufig in der Virendiagnose verwendet werden. Für diese Methoden benötigt man eine reine Vorbereitung eines bekannten Antigens oder Antikörper oder beide um die Probe zu standardisieren. Diese Probe wird mit einer Probe des reinen Antikörpers beschrieben, aber die Grundregel ist ähnlich, wenn reines Antigen anstatt benutzt wird. In RIA für ein Antigen, wird reiner Antikörper gegen dieses Antigen radioaktiv, normalerweise mit 125I beschriftet; für das ELISA wird ein Enzym chemisch mit dem Antikörper gebunden. Der unbenannte Bestandteil, der in diesem Fall Antigen sein würde, wird zu einem festen Support, wie den Vertiefungen einer Plastikmultiwelplatte angebracht, die eine bestimmte Menge jedes möglichen Proteins aufsaugt.

Der beschriftete Antikörper wird an das unbenannte Antigen, unter Bedingungen binden lassen, in denen unspezifische Absorption geblockt wird, und jeder ungebundene Antikörper und andere Proteine werden weg gewaschen.

Der Antikörper, der an RIA bindet, wird direkt in der Menge von Radioaktivität ausgedrückt beibehalten durch die überzogenen Vertiefungen, während in Elisa gemessen und bindet wird entdeckt durch eine Reaktion, die ein farbloses Substrat in ein farbiges Reaktion Produkt umwandelt. Die Farbe Änderung kann gelesen werden direkt im Reaktion Tellersegment und Datenerfassung sehr einfach bilden, und ELISA vermeidet auch die Gefahren von Radioaktivität. Dieses bildet ELISA die bevorzugte Methode für mehr direkte verbindliche Proben.

Beschriftete Anti-Immunoglobulin Antikörper können in RIA oder in ELISA auch benutzt werden, um Schwergängigkeit des unbenannten Antikörpers zu den unbenannten Antigen-überzogenen Platten zu entdecken. In diesem Fall wird der beschriftete Anti-Immunoglobulin Antikörper benutzt in, was eine zweite Schicht ‘benannt wird’. Der Gebrauch von einer zweiten Schicht verstärkt auch das Signal, da mindestens zwei Moleküle des beschrifteten anti-immunoglobin Antikörpers können, an jeden unbenannten Antikörper zu binden. RIA und ELISA können mit dem unbenannten Antikörper auch durchgeführt werden, der auf den Platten und dem beschrifteten Antigen hinzugefügt werden gehaftet wird.

Abbildung: Die Grundregel des Enzyms band Immunosorbentprobe (ELISA)

elisa

Um Antigen A zu entdecken, wird gereinigtes Antikörperbesondere für Antigen A chemisch mit einem Enzym gebunden. Die geprüft zu werden Proben sind auf die Oberfläche der Plastikvertiefungen überzogen, an die sie nonspecifically binden. Residuell klebrige Sites auf dem Plastik werden geblockt, indem man die irrelevanten Proteine hinzufügt (nicht gezeigt). Der beschriftete Antikörper dann den Vertiefungen unter Bedingungen in denen nicht spezifische Schwergängigkeit hinzugefügt wird