Immunofluoreszenz-Mikroskopie-Technik und Theorie

Immunofluoreszenz-Mikroskopie

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Antikörper binden beständig und spezifisch zu ihrem entsprechenden Antigen, sind sie unschätzbar als Prüfspitzen für die Bestimmung eines bestimmten Moleküls in den Zellen, Gewebe oder Gewebe oder biologische Flüssigkeiten. Antikörpermoleküle können, um ihre Zielmoleküle in den Einzelzellen oder in den Gewebekapiteln genau zu lokalisieren durch eine Vielzahl der verschiedenen beschriftentechniken benutzt werden. Wenn der Antikörper selbst oder der antiimmunoglobulin Antikörper, der benutzt, um sie zu entdecken, mit einer Leuchtstofffärbung beschriftet, bekannt die Technik als immunoflurescence Mikroskopie. Wie in allen serologischen Techniken, bindet der Antikörper beständig an sein Antigen und erlaubt, dass ungebundener Antikörper durch vollständige Reinigung gelöscht. Wie Antikörper zu den Proteinen die Oberflächenmerkmale des Eingeborenen erkennen, gefaltetes Protein die gebürtige Struktur des Proteins, das gesuchte normalerweise Notwendigkeiten ist, irgendein durch die Anwendung der gefrorenen Gewebekapitel konserviert zu werden, die örtlich festgelegt sind, erst nachdem die Antikörperreaktion durchgeführt worden. Einige Antikörper binden jedoch Proteine, selbst wenn sie denaturiert, und solche Antikörper binden spezifisch sogar an Protein in örtlich festgelegten Gewebekapiteln.

Die Leuchtstofffärbung kann direkt zum spezifischen Antikörper kovalent angebracht werden, aber häufiger, entdeckt der verklemmte Antikörper durch Leuchtstoffc$anti-immunoglobulin, eine Technik, die als indirekte Immunofluoreszenz bekannt ist. Die Färbungen, die für immunofluroscence gewählt, beendet durch Licht von einer Wellenlänge, normalerweise blau oder grün und ausstrahlen Licht einer anderen Wellenlänge im sichtbaren Spektrum en. Die geläufigsten Leuchtstofffärbungen sind Fluoreszin, die Licht-, Texas-Rot- und Peridinnchlorophyllprotein (PerCP) emitsgreen, die rotes Licht ausstrahlen, und Rhodamin und Phykoerythrin (PET) die orange/rotes Licht ausstrahlen. Indem man vorgewählte Filter, nur verwendet, das Licht, das von der Färbung kommen oder das benutzte flurochrome entdeckt im Fluoreszenzmikroskop. Diese Technik kann verwendet werden, um die Verteilung jedes möglichen Proteins zu entdecken. Durch die Befestigung der verschiedenen Färbungen zu den verschiedenen Antikörpern, die Verteilung von zwei oder mehr Molekülen kann in der gleichen Zelle oder in Gewebekapitel festgestellt werden.

Die Neuentwicklung des confocal Leuchtstoffmikroskops, das computergestützte Techniken verwendet, um ein ultradünnes optisches Kapitel einer Zelle oder des Gewebes zu produzieren, gibt sehr hohe Auflösungimmunofluoreszenzmikroskopie ohne die Notwendigkeit an der durchdachten Beispielvorbereitung. Die Auflösung des confocal Mikroskops kann unter Verwendung der Niedrigintensität Ablichtung weiter erhöht werden, damit zwei Photonen benötigt, um das flurochrome aufzuregen. Ein pulsiertes Laserstrahl verwendet und nur wenn es in die Brennebene der microscopeis die Intensität fokussiert, die genügend ist, Fluoreszenz aufzuregen. Auf diese Art kann die Fluoreszenzemission selbst auf das optische Kapitel eingeschränkt werden.

Eine wichtige Entwicklung im Bereich der Mikroskopie gewesen der Gebrauch von Zeitversehen videomikroskopie, in dem empfindliche digitale Videokameras die Bewegung der Leuchtstoff beschrifteten Moleküle in den Zellenmembranen und in ihrer Wiederverteilung speichern, wenn Zellen Kontakt mit einander erben. Zelle-Oberfläche Moleküle können auf zwei Hauptarten Leuchtstoff beschriftet werden. Ein ist durch die Schwergängigkeit der flurochrome-beschrifteten tollen Fragmente der Antikörper, die für das Protein des Interesses spezifisch sind; das andere ist, indem es ein Schmelzverfahrensprotein festlegt, in dem das Protein des Interesses bis eins einer Familie der Leuchtstoffproteine angebracht worden, die von den Quallen wie GFP erhalten. Die Liste der vorhandenen Leuchtstoffkennsätze umfaßt jetzt die Rote, Blaue, Cyan-blaue oder yellw Leuchtstoffproteine.