Immunofluoreszenz-Mikroskopie-Technik und Theorie

Immunofluoreszenz-Mikroskopie

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Antikörper binden beständig und spezifisch zu ihrem entsprechenden Antigen, sind sie unschaetzbar als Prüfspitzen für das Kennzeichnen eines bestimmten Moleküls in den Zellen, Gewebe oder Gewebe oder biologische Flüssigkeiten. Antikörpermoleküle können, um ihre Zielmoleküle in den Einzelzellen oder in den Gewebekapiteln genau zu lokalisieren durch eine Vielzahl der unterschiedlichen beschriftenden Techniken benutzt werden. Wenn der Antikörper selbst oder der antiimmunoglobulin Antikörper, der benutzt wird, um sie zu entdecken, mit einer Leuchtstofffärbung beschriftet wird, bekannt die Technik als immunoflurescence Mikroskopie. Wie in allen serologischen Techniken, bindet der Antikörper beständig an sein Antigen und erlaubt, daß ungebundener Antikörper durch vollständige Reinigung gelöscht wird. Wie Antikörper zu den Proteinen die Oberflächenmerkmale des Eingeborenen erkennen, gefaltetes Protein die gebürtige Struktur des Proteins, das gesuchte normalerweise Notwendigkeiten ist, irgendein durch das Verwenden der gefrorenen Gewebekapitel konserviert zu werden, die repariert werden, nur nachdem die Antikörperreaktion durchgeführt worden ist. Einige Antikörper binden jedoch Proteine, selbst wenn sie denaturiert werden, und solche Antikörper binden spezifisch gleichmäßiges an Protein in örtlich festgelegten Gewebekapiteln.

Die Leuchtstofffärbung kann direkt zum spezifischen Antikörper kovalent angebracht werden, aber häufiger, wird der verklemmte Antikörper durch LeuchtstoffAnti-immunoglobulin, eine Technik entdeckt, die als indirekte Immunofluoreszenz bekannt ist. Die Färbungen, die für immunofluroscence gewählt werden, werden durch Licht von einer Wellenlänge beendet, normalerweise blau oder grün und Licht einer anderen Wellenlänge im sichtbaren Spektrum ausstrahlen. Die geläufigsten Leuchtstofffärbungen sind Fluoreszin, die Licht-, Texas Rot- und Peridinnchlorophyllprotein (PerCP) emitsgreen, die rotes Licht ausstrahlen, und Rhodamin und Phykoerythrin (PET) die orange/red Licht ausstrahlen. Indem man vorgewählte Filter, nur verwendet, das Licht, das von der Färbung kommen oder das benutzte flurochrome wird im Fluoreszenzmikroskop entdeckt. Diese Technik kann verwendet werden, um die Verteilung jedes möglichen Proteins zu entdecken. Indem man unterschiedliche Färbungen zu den unterschiedlichen Antikörpern, die Verteilung anbringt von, können zwei oder mehr Molekülen in der gleichen Zelle oder in Gewebekapitel festgestellt werden.

Die Neuentwicklung des confocal Leuchtstoffmikroskops, das computergestützte Techniken verwendet, um ein ultrathin optisches Kapitel einer Zelle oder des Gewebes zu produzieren, gibt sehr hohe Zerlegungimmunofluoreszenzmikroskopie ohne die Notwendigkeit an der durchdachten Beispielvorbereitung. Die Zerlegung des confocal Mikroskops kann mit Niedrigintensität Ablichtung weiter erhöht werden, damit zwei Photonen benoetigt werden, um das flurochrome aufzuregen. Ein pulsierter Laserstrahl wird benutzt und nur wenn er in die fokale Fläche der microscopeis die Intensität fokussiert wird, die genügend ist, Fluoreszenz aufzuregen. Auf diese Art kann die Fluoreszenzemission selbst auf das optische Kapitel eingeschränkt werden.

Eine wichtige Entwicklung im Bereich der Mikroskopie ist der Gebrauch von Zeit-Versehen videomikroskopie gewesen, in dem empfindliche digitale videokameras die Bewegung der fluorescently beschrifteten Moleküle in den Zelle Membranen und in ihrer Wiederverteilung speichern, wenn Zellen in Kontakt mit einander kommen. Zelle-Oberfläche Moleküle können in zwei Hauptmöglichkeiten fluorescently beschriftet werden. Ein ist durch die Schwergängigkeit der flurochrome-beschrifteten Fab Fragmente der Antikörper, die für das Protein von intrest spezifisch sind; das andere ist, indem es ein Schmelzverfahren Protein festlegt, in dem das Protein von intrest bis eins einer Familie der florescent Proteine angebracht worden ist, die von den Quallen wie GFP erhalten werden. Die Liste der vorhandenen Leuchtstoffkennsätze enthält jetzt die Rote, Blaue, Cyan-blaue oder yellw Leuchtstoffproteine.