Radioimmunoassays ELISA

Πνευματικά δικαιώματα 2006 - AntibodyStation.

Radioimmunoassay (RIA), και ένζυμο-συνδεμένη immunosorbent δοκιμή (ELISA), και ανταγωνιστική δοκιμή παρεμπόδισης.

Radioimmunoassay (RIA) και η ένζυμο-συνδεμένη immunosorbent δοκιμή (ELISA) είναι άμεσες δεσμευτικές δοκιμές για το αντίσωμα ή το αντιγόνο και και η δύο εργασία για την ίδια αρχή, αλλά τα μέσα το συγκεκριμένο συσχετισμό είναι διαφορετικά.  Radioimmunoassays χρησιμοποιούνται συνήθως για να μετρήσουν τα επίπεδα ορμονών στα ρευστά αίματος και ιστού, ενώ οι δοκιμές ELISA χρησιμοποιούνται συχνά στα προερχόμενα από ιό διαγνωστικά.  Και για αυτές τις μεθόδους κάποιος χρειάζεται μια καθαρή προετοιμασία ενός γνωστού αντιγόνου ή ενός αντισώματος, ή και οι δύο, προκειμένου να τυποποιηθεί η δοκιμή.  Αυτή η δοκιμή θα περιγραφεί με ένα δείγμα του καθαρού αντισώματος, αλλά η αρχή είναι παρόμοια εάν το καθαρό αντιγόνο χρησιμοποιείται αντ' αυτού.  Σε RIA για ένα αντιγόνο, το καθαρό αντίσωμα ενάντια σε εκείνο το αντιγόνο ονομάζεται από ραδιενέργεια, συνήθως με 125I για το ELISA, ένα ένζυμο συνδέεται χημικά με το αντίσωμα.  Το unlabeled συστατικό, που σε αυτήν την περίπτωση θα ήταν αντιγόνο, είναι συνδεμένο με μια στερεά υποστήριξη, όπως τα φρεάτια ενός πλαστικού multiwell πιάτου, το οποίο θα απορροφήσει μια ορισμένη ποσότητα οποιασδήποτε πρωτεϊ'νης.  

Το επονομαζόμενο αντίσωμα επιτρέπεται για να δεσμεύσει στο unlabeled αντιγόνο, υπό τους όρους όπου η μη συγκεκριμένη απορρόφηση εμποδίζεται, και οποιοδήποτε απεριόριστο αντίσωμα και άλλες πρωτεϊ'νες πλένονται μακριά.

Το αντίσωμα που δεσμεύει σε RIA μετριέται άμεσα από την άποψη του ποσού ραδιενέργειας που διατηρείται από τα ντυμένα φρεάτια, ενώ σε Elisa, η δέσμευση ανιχνεύεται από μια αντίδραση που μετατρέπει ένα άχρωμο υπόστρωμα σε ένα προϊόν χρωματισμένης αντίδρασης.  Η αλλαγή χρώματος μπορεί να διαβαστεί άμεσα στο δίσκο αντίδρασης, καθιστώντας τη συλλογή δεδομένων πολύ εύκολη, και ELISA αποφεύγει επίσης τους κινδύνους της ραδιενέργειας.  Αυτό κάνει ELISA τη συνιστώμενη μέθοδο για τις αμεσότερες δεσμευτικές δοκιμές.

Τα επονομαζόμενα αντισώματα αντι-ανοσοσφαιρινών μπορούν επίσης να χρησιμοποιηθούν σε RIA ή ELISA για να ανιχνεύσουν το συσχετισμό του unlabeled αντισώματος στα unlabeled αντιγόνο-ντυμένα πιάτα.  Σε αυτήν την περίπτωση, το επονομαζόμενο αντίσωμα αντι-ανοσοσφαιρινών χρησιμοποιείται σε αυτό που καλείται ένα ‘δεύτερο στρώμα’.  Η χρήση ενός δεύτερου στρώματος ενισχύει επίσης το σήμα, δεδομένου ότι τουλάχιστον δύο μόρια του επονομαζόμενου αντισώματος αντι-ημμuνογλοψην είναι σε θέση να δεσμεύσουν σε κάθε unlabeled αντίσωμα.  RIA και ELISA μπορούν επίσης να πραγματοποιηθούν με το unlabelled αντίσωμα που κολλιέται στα πιάτα και το επονομαζόμενο αντιγόνο προστιθέμενα.

Αριθμός:  Η αρχή του ενζύμου σύνδεσε immunosorbent τη δοκιμή (ELISA)

Για να ανιχνεύσει το αντιγόνο Α, το καθαρισμένο αντίσωμα συγκεκριμένο για το αντιγόνο Α συνδέεται χημικά με ένα ένζυμο.  Τα δείγματα που εξετάζονται είναι ντυμένα επάνω στην επιφάνεια των πλαστικών φρεατίων στα οποία δεσμεύουν nonspecifically. Οι υπόλοιπες κολλώδεις περιοχές στο πλαστικό εμποδίζονται με την προσθήκη των άσχετων πρωτεϊνών (που δεν εμφανίζονται).  Το επονομαζόμενο αντίσωμα προστίθεται έπειτα στα φρεάτια υπό τους όρους όπου μη συγκεκριμένος συσχετισμός  

Πνευματικά δικαιώματα 2006 - 2007 - AntibodyStation.