Μικροσκόπηση ανοσοφθορισμού

Μάθετε για τη μικροσκόπηση ανοσοφθορισμού

Τα αντισώματα δεσμεύουν σταθερά και συγκεκριμένα στο αντίστοιχο αντιγόνο τους, είναι ανεκτίμητα ως ελέγχους για τον προσδιορισμό ενός ιδιαίτερου μορίου στα κύτταρα, τους ιστούς, ή τους ιστούς, ή τα βιολογικά ρευστά.  Τα μόρια αντισωμάτων μπορούν να χρησιμοποιηθούν για να εντοπίσουν τα μόρια στόχων τους ακριβώς στα μονά κύτταρα ή στα τμήματα ιστού από ποικίλες διαφορετικές τεχνικές μαρκαρίσματος.  Όταν το ίδιο το αντίσωμα, ή το αντίσωμα antiimmunoglobulin που χρησιμοποιείται για να ανιχνεύσει αυτό ονομάζεται με μια φθορισμού χρωστική ουσία η τεχνική είναι γνωστή ως μικροσκόπηση immunoflurescence.  Όπως σε όλες τις ορολογικές τεχνικές, το αντίσωμα δεσμεύει σταθερά στο αντιγόνο του, επιτρέποντας στο απεριόριστο αντίσωμα για να αφαιρεθεί από τη λεπτομερή πλύση.  Δεδομένου ότι τα αντισώματα στις πρωτεΐνες αναγνωρίζουν τα χαρακτηριστικά γνωρίσματα επιφάνειας του ντόπιου, η διπλωμένη πρωτεΐνη η εγγενής δομή της πρωτεΐνης που επιδιώκεται συνήθως πρέπει να συντηρηθεί, καθεμία με τη χρησιμοποίηση των παγωμένων τμημάτων ιστού που καθορίζονται μόνο αφού έχει εκτελεσθεί η αντίδραση αντισωμάτων.  Μερικά αντισώματα, εντούτοις, δεσμεύουν τις πρωτεΐνες ακόμα κι αν μετουσιώνονται, και τέτοια αντισώματα θα δεσμεύσουν συγκεκριμένα ακόμη και στην πρωτεΐνη στα σταθερά τμήματα ιστού.

Η φθορισμού χρωστική ουσία μπορεί να συνδεθεί covalently άμεσα με το συγκεκριμένο αντίσωμα, αλλά συχνότερα, το συνδεδεμένο αντίσωμα ανιχνεύεται από τη φθορισμού αντι-ανοσοσφαιρίνη, μια τεχνική γνωστή ως έμμεσος ανοσοφθορισμός.  Οι χρωστικές ουσίες που επιλέγονται για το immunofluroscence βγαίνονται από το φως ενός μήκους κύματος, συνήθως μπλε ή πράσινος, και εκπέμπουν το φως ενός διαφορετικού μήκους κύματος στο ορατό φάσμα.  Οι πιό κοινές φθορισμού χρωστικές ουσίες είναι fluorescein, που το φως, το κόκκινο του Τέξας και η πρωτεΐνη χλωροφύλλης Peridinn (PerCP), οι οποίες εκπέμπουν το κόκκινο φως, και rhodamine και phycoerythrin (PE) που εκπέμπουν το πορτοκαλί/κόκκινο φως.  Με τη χρησιμοποίηση των εκλεκτικών φίλτρων, μόνο το φως που προέρχεται από τη χρωστική ουσία ή flurochrome χρησιμοποιούμενο ανιχνεύεται στο μικροσκόπιο φθορισμού.  Αυτή η τεχνική μπορεί να χρησιμοποιηθεί για να ανιχνεύσει τη διανομή οποιασδήποτε πρωτεΐνης.  Με την ένωση των διαφορετικών χρωστικών ουσιών με τα διαφορετικά αντισώματα, η διανομή δύο ή περισσότερων μορίων μπορεί να καθοριστεί στο ίδιο τμήμα κυττάρων ή ιστού.

Η πρόσφατη ανάπτυξη του ομοεστιακού φθορισμού μικροσκοπίου, που χρησιμοποιεί τις με τη βοήθεια υπολογιστή τεχνικές για να παραχθεί ένα ultrathin οπτικό τμήμα ενός κυττάρου ή ενός ιστού, δίνει πολύ τη μικροσκόπηση ανοσοφθορισμού υψηλού ψηφίσματος χωρίς την ανάγκη για την επιμελημένη προετοιμασία δειγμάτων.  Το ψήφισμα του ομοεστιακού μικροσκοπίου μπορεί να αυξηθεί περαιτέρω χρησιμοποιώντας το φωτισμό χαμηλός-έντασης έτσι ώστε δύο φωτόνια απαιτούνται για να διεγείρουν το flurochrome.  Μια παλόμενη ακτίνα λέιζερ χρησιμοποιείται, και μόνο όταν στρέφεται στο εστιακό αεροπλάνο των microscopeis την ένταση επαρκή για να διεγείρει το φθορισμό.  Κατά αυτόν τον τρόπο η ίδια η εκπομπή φθορισμού μπορεί να περιοριστεί στο οπτικό τμήμα.

Μια σημαντική ανάπτυξη στον τομέα της μικροσκόπησης είναι η χρήση της τηλεοπτικής μικροσκόπησης χρόνος-σφάλματος, στην οποία οι ευαίσθητες ψηφιακές τηλεοπτικές φωτογραφικές μηχανές καταγράφουν τη μετακίνηση των fluorescently επονομαζόμενων μορίων στις μεμβράνες κυττάρων και την ανακατανομή τους όταν μπαίνουνε σε τα κύτταρα την επαφή το ένα με το άλλο.  Τα μόρια κύτταρο-επιφάνειας μπορούν να ονομαστούν fluorescently με δύο βασικούς τρόπους.  Κάποιος είναι από το συσχετισμό των flurochrome-επονομαζόμενων υπέροχων τεμαχίων των αντισωμάτων συγκεκριμένων για την πρωτεΐνη ενδιαφέροντος άλλος είναι με την παραγωγή μιας πρωτεΐνης τήξης, στην οποία η πρωτεΐνη ενδιαφέροντος έχει συνδεθεί με μια από μια οικογένεια των φθορισμού πρωτεϊνών που λαμβάνονται από jellyfish όπως GFP.  Ο κατάλογος διαθέσιμων φθορισμού ετικετών περιλαμβάνει τώρα τις κόκκινες, μπλε, κυανές ή yellw φθορισμού πρωτεΐνες.

Πνευματικά δικαιώματα 2006 - AntibodyStation.