Técnica y teoría del radioinmunoanálisis de ELISA

Radioinmunoanálisis de ELISA

Radioinmunoanálisis (RIA), y análisis enzima-conectado del immunosorbent (ELISA), y análisis competitivo de la inhibición.

El radioinmunoanálisis (RIA) y el análisis enzima-conectado del immunosorbent (ELISA) son análisis obligatorios directos para el anticuerpo o antígeno y ambos trabajan en el mismo principio, pero los medios de detectar el atascamiento específico son diferentes. Los radioinmunoanálisis se utilizan comúnmente para medir los niveles de hormonas en sangre y líquidos de tejido fino, mientras que los análisis de ELISA se utilizan con frecuencia en diagnóstico viral. Para estos métodos uno necesita una preparación pura de un antígeno sabido o el anticuerpo, o ambos, para estandardizar el análisis. Este análisis será descrito con una muestra del anticuerpo puro, pero el principio es similar si el antígeno puro se utiliza en lugar de otro. En RIA para un antígeno, el anticuerpo puro contra ese antígeno se etiqueta radiactivo, generalmente con 125I; para el ELISA, una enzima se conecta químicamente al anticuerpo. El componente sin etiqueta, que en este caso sería antígeno, se asocia a una ayuda sólida, tal como los receptores de papel de una placa plástica del multiwell, que absorberá cierta cantidad de cualquier proteína.

El anticuerpo etiquetado se permite atar al antígeno sin etiqueta, bajo condiciones donde se bloquea la absorción no específica, y cualquier anticuerpo desatado y otras proteínas se lavan lejos.

El anticuerpo que ata a RIA se mide directamente en los términos de la cantidad de radiactividad conservada por los receptores de papel revestidos, mientras que en Elisa, atando es detectado por una reacción que convierta un substrato descolorido en un producto coloreado de la reacción. El cambio del color se puede leer directamente en la bandeja de la reacción, haciendo la colección de datos muy fácil, y ELISA también evita los peligros de la radiactividad. Esto hace ELISA el método preferido para más los análisis obligatorios directos.

Los anticuerpos etiquetados de la contra-inmunoglobulina se pueden también utilizar en RIA o ELISA para detectar el atascamiento del anticuerpo sin etiqueta a las placas anti'geno-revestidas sin etiqueta. En este caso, el anticuerpo etiquetado de la contra-inmunoglobulina se utiliza en qué se llama ‘una segunda capa’. El uso de una segunda capa también amplifica la señal, pues por lo menos dos moléculas del anticuerpo etiquetado del anti-immunoglobin pueden atar a cada anticuerpo sin etiqueta. RIA y ELISA se pueden también realizar con el anticuerpo sin etiqueta pegado en las placas y el antígeno etiquetado agregados.

Figura: El principio de la enzima conectó el análisis del immunosorbent (ELISA)

elisa

Para detectar el antígeno A, el específico purificado del anticuerpo para el antígeno A se conecta químicamente a una enzima. Las muestras que se probarán están revestidas sobre la superficie de los receptores de papel plásticos a los cuales atan nonspecifically. Los sitios pegajosos residuales en el plástico son bloqueados agregando las proteínas inaplicables (no mostradas). El anticuerpo etiquetado entonces se agrega a los receptores de papel bajo condiciones donde atascamiento no específico