Técnica y teoría del radioinmunoanálisis de ELISA

Radioinmunoanálisis de ELISA

Radioinmunoanálisis (RIA), y análisis enzima-conectado del inmunosorbente (ELISA), y análisis competitivo de la inhibición.

El radioinmunoanálisis (RIA) y el análisis enzima-conectado del inmunosorbente (ELISA) son análisis obligatorios directos para el anticuerpo o antígeno y ambos trabajan en el mismo principio, pero los medios de detectar el atascamiento específico son diferentes. Los radioinmunoanálisis son de uso general medir los niveles de hormonas en sangre y líquidos de tejido, mientras que los análisis de ELISA se utilizan con frecuencia en diagnósticos virales. Para estos métodos uno necesita una preparación pura de un antígeno sabido o el anticuerpo, o ambos, para estandardizar el análisis. Este análisis será descrito con una muestra de anticuerpo puro, pero el principio es similar si el antígeno puro se utiliza en lugar de otro. En RIA para un antígeno, el anticuerpo puro contra ese antígeno se etiqueta radiactivo, generalmente con 125I; para el ELISA, una enzima se conecta químicamente al anticuerpo. El componente sin etiqueta, que en este caso sería antígeno, se asocia a una ayuda sólida, tal como los receptores de papel de una placa plástica del multiwell, que absorberá una cantidad determinada de cualquier proteína.

El anticuerpo etiquetado se permite atar al antígeno sin etiqueta, bajo condiciones donde se bloquea la absorción no específica, y se quitan cualquier anticuerpo desatado y otras proteínas.

El anticuerpo que ata a RIA se mide directamente en términos de cantidad de radiactividad conservada por los receptores de papel revestidos, mientras que en Elisa, atando es detectado por una reacción que convierta un substrato descolorido en un producto de la coloración. El cambio del color se puede leer directamente en la bandeja de la reacción, haciendo la colección de datos muy fácil, y ELISA también evita los peligros de la radiactividad. Esto hace ELISA el método preferido para más los análisis obligatorios directos.

Los anticuerpos etiquetados de la anti-inmunoglobulina se pueden también utilizar en RIA o ELISA para detectar el atascamiento del anticuerpo sin etiqueta a las placas antígeno-revestidas sin etiqueta. En este caso, el anticuerpo etiquetado de la anti-inmunoglobulina se utiliza en qué se llama un `segundos layer'. El uso de una segunda capa también amplifica la señal, pues por lo menos dos moléculas del anticuerpo etiquetado de la anti-inmunoglobina pueden atar a cada anticuerpo sin etiqueta. RIA y ELISA se pueden también realizar con el anticuerpo sin etiqueta pegado en las placas y el antígeno etiquetado agregados.

Figura: El principio de la enzima conectó el análisis del inmunosorbente (ELISA)

elisa

Para detectar el antígeno A, el específico purificado del anticuerpo para el antígeno A se conecta químicamente a una enzima. Las muestras que se probarán están revestidas sobre la superficie de los receptores de papel plásticos a los cuales atan no específico. Los sitios pegajosos residuales en el plástico son bloqueados agregando las proteínas inaplicables (no mostradas). El anticuerpo etiquetado entonces se agrega a los receptores de papel bajo condiciones donde atascamiento no específico