Microscopia de la inmunofluorescencia

Aprenda sobre microscopia de la inmunofluorescencia

Los anticuerpos atan estable y específicamente a su antígeno correspondiente, son inestimables como puntas de prueba para identificar una molécula determinada en células, los tejidos, o los tejidos, o los líquidos biológicos.  Las moléculas del anticuerpo se pueden utilizar para localizar sus moléculas de la blanco exactamente en células o en secciones del tejido por una variedad de diversas técnicas de etiquetado.  Cuando el anticuerpo sí mismo, o el anticuerpo del antiimmunoglobulin usado para detectarlo se etiqueta con un tinte fluorescente la técnica se conoce como microscopia del immunoflurescence.  Como en todas las técnicas serológicas, el anticuerpo ata estable a su antígeno, permitiendo que el anticuerpo desatado sea quitado por el lavado completo.  Como los anticuerpos a las proteínas reconocen las características superficiales del natural, proteína plegable la estructura nativa de la proteína que es generalmente buscadas necesidades de ser preservado, cualquiera usando las secciones congeladas del tejido que son fijas solamente después que se ha realizado la reacción del anticuerpo.  Algunos anticuerpos, sin embargo, atan las proteínas incluso si se desnaturalizan, y tales anticuerpos atarán específicamente incluso a la proteína en secciones fijas del tejido.

El tinte fluorescente se puede covalente asociar directamente al anticuerpo específico, pero más comunmente, el anticuerpo encuadernado es detectado por la anti-inmunoglobulina fluorescente, una técnica conocida como inmunofluorescencia indirecta.  Los tintes elegidos para el immunofluroscence son salidos por la luz de una longitud de onda, generalmente azul o verde, y emiten la luz de una diversa longitud de onda en el espectro visible.  Los tintes fluorescentes mas comunes son fluoresceína, que emitsgreen la proteína de la clorofila de la luz, del rojo de Tejas y de Peridinn (PerCP), que emiten la luz roja, y rhodamina y la ficoeritrina (el PE) que emiten la luz anaranjada/roja.  Usando los filtros selectivos, solamente la luz que viene del tinte o el flurochrome usado se detecta en el microscopio de fluorescencia.  Esta técnica se puede utilizar para detectar la distribución de cualquier proteína.  Asociando diversos tintes a diversos anticuerpos, la distribución de dos o más moléculas puede ser determinado en la misma célula o sección del tejido.

El reciente desarrollo del microscopio fluorescente confocal, que utiliza técnicas automatizadas para producir una sección óptica ultrafina de una célula o de un tejido, da microscopia muy de alta resolución de la inmunofluorescencia sin la necesidad de la preparación elaborada de la muestra.  La resolución del microscopio confocal se puede aumentar más a fondo usando la iluminación de la bajo-intensidad para requerir dos fotones para excitar el flurochrome.  Se utiliza un de rayo láser pulsada, y solamente cuando se enfoca en el plano focal de los microscopeis la intensidad suficiente excitar fluorescencia.  De esta manera la emisión sí mismo de la fluorescencia se puede restringir a la sección óptica.

Un desarrollo importante en el área de la microscopia ha sido el uso de la microscopia video del tiempo-lapso, en el cual las cámaras de vídeo digitales sensibles registran el movimiento de moléculas fluorescente etiquetadas en membranas celulares y su redistribución cuando las células entran en el contacto con uno a.  las moléculas de la Célula-superficie se pueden fluorescente etiquetar de dos maneras principales.  Uno está al lado del atascamiento de fragmentos fabulosos flurochrome-etiquetados de los anticuerpos específicos para la proteína del interés; el otro está generando una proteína de la fusión, en la cual la proteína del interés se ha asociado a uno de una familia de proteínas fluorescentes obtenidas de medusas como GFP.  La lista de escrituras de la etiqueta fluorescentes disponibles ahora incluye las proteínas fluorescentes rojas, azules, ciánicas o del yellw.

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