Affinity Chromatography - Antibodies Affinity Kromatografia - Vasta-aineita

Affinity Chromatography of Antibodies Affinity Kromatografia vasta-aineiden

Purification of Antibody using Affinity Methods Puhdistus-vasta-ainetta käyttäen Affinity Methods

Specific antibody can be isolated from an antiserum. Affinity Chromatography separates molecules on their differing affinities for a ligand. Erityistä vasta-aine voidaan eristää, joka antiseerumilla. Affinity Kromatografia erottaa molekyylejä niiden erilaisia kantoja: ligandi.

This method exploits the specific binding of antibody to antigen held on a solid matrix. Antigen is bound covalently to small, chemically reactive beads, which are loaded into a column, and the antiserum is allowed to pass over the beads. Tämä menetelmä hyödyntää erityisiä sitova, vasta-aine-antigeeni järjestettiin vankka matriisi. Antigeeni on sidottu covalently pieniä, kemiallisesti reaktiivista helmiä, jotka on ladattu sarakkeen, ja antiseerumin saa kulkea yli helmiä. The specific antibodies bind, while all the other proteins in the serum, including the antibodies to other substances, can be washed away. The erityisiä vasta-aineita sitovasti, kun taas kaikkien muiden proteiinien seerumista, myös vasta-aineita muita aineita, voidaan pestä pois.

The specific antibodies are then eluted, typically by lowering the pH to 2.5 or raising it to greater than 11. Antibodies bind stably under physiological conditions of salt concentration, temperature, and pH, but the binding is reversible as the bonds are noncovalent. The erityisiä vasta-aineita, jotka sitten ovat eluoidaan tyypillisesti alentamalla pH on 2,5 tai korottamalla sitä suurempi kuin 11. Vasta-ainetta sitoutuu vakituisesti alle fysiologiset edellytykset suolan pitoisuus, lämpötila, pH, mutta sitoutuminen on kääntyvä kuin joukkovelkakirjalainat ovat noncovalent.

Affinity chromatography can also be used to purify antigens from complex mixtures by using beads coated with specific antibody. Affinity kromatografia voidaan käyttää myös puhdistaa antigeenejä seoksia käyttämällä helmiä päällystetty erityisiä vasta-aine.

Affinity chromatography uses antigen-antibody binding to purify antigens or antibodies. To purify a specific antigen from a complex mixture of molecules, a monoclonal antibody is attached to an insoluble matrix, such as chromatography beads, and the mixture of molecules is passed over the matrix. Affinity kromatografiaa käyttää antigeeni-vasta-aineiden sitoutumisen puhdistaa antigeenien tai vasta-aineita. Puhdistaa tietyn antigeenin osoittaminen monimutkainen seos molekyylejä, monoklonaalinen vasta-aine on liitetty liukenemattomaksi matriisi, kuten kromatografiaa helmiä, ja seos molekyylien on siirtynyt matriisi .

The specific antibody binds the antigen of interest; other molecules are washed away. Erityinen vasta-aine sitoo antigeenin kiinnostaa; muita molekyylejä, jotka pestään pois.

Specific antigen is then eluted by altering the pH, which can usually disrupt antibody-antigen bonds. Erityiset antigeeni on sitten eluoituvat muuttamalla pH, mikä voi yleensä häiritsevät vasta-aine-antigeeni-obligaatioita.

Antibodies can be purified in the same way on beads coupled to antigen. Vasta-aineita voidaan puhdistetaan samalla tavalla helmiä kytkettäväksi antigeenin.

affiniteetti kromatografiaa vasta-aine