ELISA Radioimmunoassay Technique and Theory ELISA Radioimmunoassay Technique ja teoria

ELISA Radioimmunoassays ELISA Radioimmunoassays

Radioimmunoassay (RIA), and enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), and competitive inhibition assay. Radioimmunoassay (RIA), ja entsyymi-immunologinen määritys (ELISA), ja kilpailukykyisen inhibitio assay.

Radioimmunoassay (RIA) and enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) are direct binding assays for antibody or antigen and both work on the same principle, but the means of detecting specific binding is different. Radioimmunoassays are commonly used to measure the levels of hormones in blood and tissue fluids, while ELISA assays are frequently used in viral diagnostics. For both these methods one needs a pure preparation of a known antigen or antibody, or both, in order to standardize the assay. This assay will be described with a sample of pure antibody, but the principle is similar if pure antigen is used instead. In RIA for an antigen, pure antibody against that antigen is radioactively labeled, usually with 125I; for the ELISA, an enzyme is linked chemically to the antibody. The unlabeled component, which in this case would be antigen, is attached to a solid support, such as the wells of a plastic multiwell plate, which will absorb a certain amount of any protein. Radioimmunoassay (RIA) ja entsyymi-immunologinen määritys (ELISA) ovat suoria sitovia määritykset vasta-aine tai antigeenin ja molemmat työtä saman periaatteen, mutta keino havaita tiettyjä sitovia on erilainen. Radioimmunoassays käytetään yleisesti mittaamaan tasoa hormoneja Veren ja kudosten nesteitä, kun taas ELISA-määritykset ovat usein käytettävistä virusperäisen diagnostiikka. Molempien näiden menetelmien tarvitsee puhdasta valmistelua tunnettu antigeeni tai vasta-aine, tai molemmat, jotta standardoimiseksi assay. Määritystä on kuvattu kanssa näyte puhdasta vasta-aine, mutta periaate on sama kuin jos puhdasta antigeenin sijaan käytetään. RIA-antigeenin, puhdasta vasta-aine vastaan, että antigeeni on radioaktiivisesti merkittyinä, yleensä 125I, että ELISA-, entsyymi on sidottu kemiallisesti vasta-aineet. otsikottomat komponentti , Joka tässä tapauksessa olisi antigeeni, on liitetty vankkaa tukea, kuten kaivot, muovi monisyvennyslevyjä, levyt, jotka imevät tietyn määrän mitään proteiinia.

The labeled antibody is allowed to bind to the unlabeled antigen, under conditions where nonspecific absorption is blocked, and any unbound antibody and other proteins are washed away. Merkitty vasta-aine on sallittua sitoa, otsikottomat antigeeni, sellaisissa olosuhteissa, joissa nonspecific imeytyminen on estetty, ja kaikki sitomattomiin vasta-aine ja muut proteiinit ovat pestään pois.

Antibody binding to RIA is measured directly in terms of the amount of radioactivity retained by the coated wells, whereas in Elisa, binding is detected by a reaction that converts a colorless substrate into a colored reaction product. The color change can be read directly in the reaction tray, making data collection very easy, and ELISA also avoids the hazards of radioactivity. This makes ELISA the preferred method for more direct binding assays. Vasta sitovia RIA on mitattu suoraan mitattuna määrä radioaktiivisuutta säilytettävä pinnoitetusta kaivoa, kun taas Elisa, sitoutuminen on havaittu reaktio, että muunnetaan colorless substraatti osaksi värillinen reaktiotuote. Värin muutos voidaan lukea suoraan, reaktio altaaseen, mikä tekee tietojen keräämistä erittäin helppoa, ja Elisa vältetään myös vaaroja koskevat radioaktiivisia aineita. Tämä tekee ELISA suositeltavin menetelmä enemmän suoria sitovia testillä.

Labeled anti-immunoglobulin anti-bodies can also be used in RIA or ELISA to detect binding of unlabeled antibody to unlabeled antigen-coated plates. In this case, the labeled anti-immunoglobulin antibody is used in what is termed a ‘second layer’. The use of a second layer also amplifies the signal, as at least two molecules of the labeled anti-immunoglobin antibody are able to bind to each unlabeled antibody. RIA and ELISA can also be carried out with unlabelled antibody stuck on the plates and labeled antigen added. Otsikoitu anti-immunoglobuliini anti-elimet voidaan käyttää myös RIA-tai ELISA havaita sitovia, otsikottomat aineen otsikottomat antigeeni-pinnoitetut levyt. Tässä tapauksessa merkitty anti-immunoglobuliini vasta-aine on käytetty niin kutsuttua "toinen kerros". Käyttö toisen kerroksen myös laajennetaan signaali, kuten vähintään kaksi molekyylejä on merkitty anti-immunoglobin vasta-aine pystyy sitomaan kunkin otsikottomat vasta-aine. RIA-ja ELISA-testi voidaan myös suorittaa unlabelled vasta-aine juuttunut Levyt ja otsikoitu antigeeni lisätty.

Figure: The principle of the enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) Kuva: Periaate, jonka mukaan entsyymin immunosorbenttimääritys (ELISA)

elisa

To detect antigen A, purified antibody specific for antigen A is linked chemically to an enzyme. The samples to be tested are coated onto the surface of plastic wells to which they bind nonspecifically. Selvitetään antigeeni A, puhdistetaan vasta-aine spesifisiä antigeeni A on sidottu kemiallisesti entsyymi. Testinäytteistä ovat päällystetty onto pinta-muovista kaivoa, joita ne sitovat nonspecifically. Residual sticky sites on the plastic are blocked by adding irrelevant proteins (not shown). The labeled antibody is then added to the wells under conditions where non specific binding Jäännösöljyt sticky-sivustoja muovinen on estetty lisäämällä merkitystä proteiinien (ei näytetä). Otsikoitu vasta-aine on sitten lisättävä kuoppiin sellaisissa olosuhteissa, joissa ei ole erityisiä sitovia