Immunofluorescence Microscopy Technique and Theory Immunofluoresenssi Mikroskopia Technique ja teoria

Immunofluorescence Microscopy Immunofluoresenssi Mikroskopia

Learn About Immunofluorescence Microscopy Tietoja Immunofluoresenssi Mikroskopia

Antibodies bind stably and specifically to their corresponding antigen, they are invaluable as probes for identifying a particular molecule in cells, tissues, or tissues, or biological fluids. Antibody molecules can be used to locate their target molecules accurately in single cells or in tissue sections by a variety of different labeling techniques. When the antibody itself, or the antiimmunoglobulin antibody used to detect it is labeled with a fluorescent dye the technique is known as immunoflurescence microscopy. As in all serological techniques, the antibody binds stably to its antigen, allowing unbound antibody to be removed by thorough washing. As antibodies to proteins recognize the surface features of the native, folded protein the native structure of the protein being sought usually needs to be preserved, either by using frozen tissue sections that are fixed only after the antibody reaction has been performed. Some antibodies, however, bind proteins even if they are denatured, and such antibodies will bind specifically even to protein in fixed tissue sections. Vasta-aineita sitoa luotettavasti ja erityisesti niiden vastaavia antigeeni, ne ovat korvaamattomia kuin luotaimiin tunnistaa tietyn molekyylin solujen, kudosten tai kudoksista tai biologisia nesteitä. Antibody molekyylejä voidaan paikantaa niiden kohde-molekyylejä oikein yhteen solujen tai kudosten pääluokat jonka eri Labeling-tekniikkaa. Kun vasta-aine itse, tai antiimmunoglobulin vasta-aine, jota käytetään havaitsemaan se on otsikoitu kanssa fluoresoiva väri-tekniikka on tunnettu immunoflurescence mikroskopia. Kuten kaikissa serologisia tekniikoita, vasta-aine sitoo vakituisesti sen antigeenin, mikä mahdollistaa sitomaton vasta-aine on poistettava perusteellinen pesu. Kuten vasta proteiinien tunnista pinnan ominaisuudet natiiville, taitettu proteiini natiiville rakenne, proteiini haetaan yleensä on säilötty, joko käyttämällä jäädytettyä kudosta pääluokat, jotka on vahvistettu vasta sen jälkeen, kun vasta-aine reaktio on suoritettu. Eräät vasta-aineita kuitenkin sitoa proteiineja, vaikka ne ovat denaturoitu, ja nämä vasta-aineet sitovat nimenomaan jopa proteiinia kiinteän kudoksen jaksoissa.

The fluorescent dye can be covalently attached directly to the specific antibody, but more commonly, the bound antibody is detected by fluorescent anti-immunoglobulin, a technique known as indirect immunofluorescence. The dyes chosen for immunofluroscence are exited by light of one wavelength, usually blue or green, and emit light of a different wavelength in the visible spectrum. The most common fluorescent dyes are fluorescein, which emitsgreen light, Texas Red and Peridinn chlorophyll protein (PerCP), which emit red light, and rhodamine and phycoerythrin (PE) which emit orange/red light. By using selective filters, only the light coming from the dye or flurochrome used is detected in the fluorescence microscope. This technique can be used to detect the distribution of any protein. By attaching different dyes to different antibodies, the distribution of two or more molecules can be determined in the same cell or tissue section. Fluoresoiva väri voidaan covalently kiinnitetty suoraan erityisiä vasta-aine, mutta enemmän yhteisesti, sitovat vasta-aine on havaittu fluoresoiva anti-immunoglobuliini, tekniikka, joka tunnetaan nimellä välilliset immunofluoresenssimenetelmällä. Värejä valitaan immunofluroscence ovat poistutaan valo yksi aallonpituus, yleensä sininen tai vihreä, ja päästää valossa eri aaltopituudella niiden näkyvän spektrin. Yleisin fluoresoivia värejä fluoreseiini, joka emitsgreen valossa, Texas Red ja Peridinn klorofylli proteiini (PerCP), jotka lähettävät punaista valoa, ja rhodamine ja phycoerythrin (PE), jotka päästää oranssi / punainen valo. Käyttämällä valikoiva suodattimet, vain valossa lähtöisin väriaine tai flurochrome käyttää, on havaittu, että fluoresenssi mikroskoopilla. Tätä menetelmää voidaan käyttää havaitsemaan jakelu mitään proteiinia. liittämällä eri väriaineiden erilaisia vasta-aineita, jakelun kahden tai useamman molekyylejä voidaan määrittää saman solujen tai kudosten osiossa.

The recent development of the confocal fluorescent microscope, which uses computer-aided techniques to produce an ultrathin optical section of a cell or tissue, gives very high resolution immunofluorescence microscopy without the need for elaborate sample preparation. The resolution of the confocal microscope can be further increased using low-intensity illumination so that two photons are required to excite the flurochrome. A pulsed laser beam is used, and only when it is focused into the focal plane of the microscopeis the intensity sufficient to excite fluorescence. In this way the fluorescence emission itself can be restricted to the optical section. Viimeaikainen kehitys, confocal fluoresoivalla mikroskoopilla, joka käyttää computer-aided tekniikka tuottaa ultrathin optinen osa solujen tai kudosten, antaa erittäin korkean resoluution immunofluoresenssimenetelmällä mikroskopia ilman tarvetta kehittää näytteen valmistelu. Päätöslauselma, confocal microscope voidaan edelleen kasvoi käyttäen matalan intensiteetin valaistuksen niin, että kaksi fotonit eivät tarvitse herätä sen flurochrome. pulssi laserhitsaus on käytetty, ja vain silloin, kun se on keskittynyt osaksi keskipiste koskettaessa microscopeis intensiteetti riittää herätä fluoresenssi. Tällä tavoin fluoresenssi päästöjen itsessään voi olla rajoitettu optinen osa.

One important development in the area of microscopy has been the use of time-lapse video microscopy, in which sensitive digital video cameras record the movement of fluorescently labeled molecules in cell membranes and their redistribution when cells come into contact with each other. Cell-surface molecules can be fluorescently labeled in two main ways. One is by the binding of flurochrome-labeled Fab fragments of antibodies specific for the protein of intrest; the other is by generating a fusion protein, in which the protein of intrest has been attached to one of a family of florescent proteins obtained from jellyfish like GFP. The list of available fluorescent labels now includes red, blue, cyan or yellw fluorescent proteins. Yksi tärkeä kehittämisen alalla mikroskopia on käytön aika-raukeavat video microscopy, jossa herkkiä digitaalisten videokameroiden kirjattava liikkuvuus fluorescently nimeltä molekyylien solun kalvot ja niiden uudelleen jakamista, kun solujen joutua kosketuksiin toistensa kanssa. Cell-ala molekyylejä voidaan fluorescently nimeltä käyttämällä pääasiassa kahta keinoa. Yksi on sitova, flurochrome-merkkisissä Fab-fragmentit, vasta-proteiinin etua, ja toinen on se tuottaa fuusio-proteiini, jolloin proteiinin etu on liitetty yhteen , perhe fluoresoivia proteiineja saadaan jellyfish kuten GFP. luettelon käytettävissä olevista fluoresoiva etiketit sisältää nyt punainen, sininen, syaani tai yellw fluoresoivia proteiineja.