Phage Display Libraries for Antibody Technique and Theory Phage Display kirjastoista Antibody Technique ja teoria

Phage Display Libraries for Antibody V-region Production Phage Display kirjastoista Antibody V-alueen Tuotanto

Phage Display Library - Antibody Production Phage Display kirjasto - Antibody Production

This technique is used for producing antibody-like molecules. Gene segments encoding the antigen-binding variable of V domains of antibodies are fused to genes encoding the coat protein of a bacteriophage. Bacteriophage containing such gene fusions are used to infect bacteria, and the resulting phage particles have coats that express the antibody-like fusion protein, with the antigen-binding domain displayed on the outside of the bateriophage. Tätä tekniikkaa käytetään tuottamaan vasta-aineisiin, kuten molekyylejä. Gene segmenttien encoding antigeenin sitovia muuttujan V aloilla vasta-aineita ovat sulatetun geeneistä encoding että takki proteiini, joka bacteriophage. Bacteriophage sisältävät tällaista geeniä fusions käytetään tartuttaa bakteereja, ja tuloksena phage hiukkaset ovat takit, että ilmaista vasta-aineisiin, kuten fuusio-proteiinin, antigeenin sitovia verkkotunnuksen näkyvät ulospäin, bateriophage.

A collection of recombinant phage, each displaying a different antigen-binding domain on its surface, is known as a phage display library. In much the same way that antibodies specific for a particular antigen can be isolated from a complex mixture by affinity chromatography, phage expressing antigen-binding domains specific for a particular antigen can be isolated by selecting the phage in the library for binding to that antigen. The phage particles that bind are recovered and used to infect fresh bacteria. Each phage isolated in this way will produce a monoclonal antigen-binding particle analogous to a monoclonal antibody. Kokoelma rekombinantti phage, kukin näytetään eri antigeenin sitovia verkkotunnuksen sen pinnalla, kutsutaan phage näyttö kirjastosta. Pitkälti samalla tavalla, että vasta tietyn antigeenin voidaan eristää monimutkainen seos, jonka hengenheimolainen kromatografialla, phage ilmaisemalla antigeenin sitovia aloilla erityisiä tietyn antigeenin voidaan eristää valitsemalla phage, kirjasto sitovia, että antigeeni. phage hiukkasia, jotka sitovat jotka otetaan talteen ja käytetään tartuttaa tuoreen bakteereja. Jokaisella phage eristetty tällä tavoin tuottamaan monoklonaalisia antigeenin sitovia hiukkasen analoginen monoklonaalinen vasta-aine.

The genes encoding the antigen binding site, which are unique to each phage, can then be recovered from the phage DNA and used to construct genes for a complete antibody molecule by joining then to parts of immunoglobulin genes that encode the invariant parts of the an antibody. When these reconstructed antibody genes are introduced into a suitable host cell line, the transfected cells can secrete antibodies with all the desirable characteristics of monoclonal antibodies of the suitable host cell line. Geenien encoding antigeenin sitovia sivuille, jotka ovat ominaisia kullekin phage, voidaan sitten toipunut phage DNA: n ja käyttää rakentaa geenejä on täydellinen vasta-aine-molekyylin liittymällä sitten osat immunoglobuliini geenejä, että koodaus on invariant osissa, yksi vasta-aine . Kun nämä uudelleen vasta-aine geenit ovat ottaneet käyttöön sopivaan vastaanottavan solulinja, transfected soluja voi secrete vasta kaikki toivottavat ominaisuudet monoklonaalisia vasta-aineita, sopivan vastaanottavan solulinja.

In much the same way that a collection of phage can display a wide variety of potential antigen-binding sites, the phage can also be engineered to display a wide variety of antigens; such a library is known as an antigen display library. In such cases, the antigen displayed are often short peptides encoded by chemically synthesized DNA sequences that have mixtures of all four nucleotides in some positions, so that all possible amino acids are incorporated. It is not usual for every position in a peptide to be allowed to vary in this way, since the number of variable positions, there are over 2 x 1010 possible sequences of eight amino acids. Vuonna paljon samalla tavalla, että kokoelma phage voi näyttää hyvin monenlaisia mahdollisia antigeenin sitovia sivustoja, phage voidaan myös suunniteltu näyttämään monenlaisia antigeenejä; tällainen kirjasto on tunnettu antigeenin näyttää kirjastoon. Tällaisissa tapauksissa , Antigeeni esillä ovat usein lyhyitä peptidejä koodaama kemiallisesti syntesoiduista DNA-sekvenssejä, jotka ovat sekoituksia kaikkien neljän nukleotideja joitakin kantoja, niin että kaikki mahdolliset aminohappoja on sisällytetty. Se ei ole tavallista, jokainen kantaa peptidi voisivat vaihdella tällä tavalla, koska useita muuttuja kantoja, on yli 2 x 1010 mahdollista sekvenssien kahdeksan aminohappoja.