Microscopie d'Immunofluorescence

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Les anticorps lient stablement et spécifiquement à leur antigène correspondant, ils sont de valeur inestimable en tant que sondes pour identifier une molécule particulière en cellules, tissus, ou tissus, ou fluides biologiques.  Des molécules d'anticorps peuvent être employées pour localiser leurs molécules de cible exactement dans les cellules ou dans des sections de tissu par une variété de différentes techniques étiquetantes.  Quand l'anticorps lui-même, ou l'anticorps d'antiimmunoglobulin employé pour la détecter est étiqueté avec un colorant fluorescent la technique est connue comme microscopie d'immunoflurescence.  Comme dans toutes les techniques sérologiques, l'anticorps lie stablement à son antigène, permettant à l'anticorps non lié d'être éliminé par le lavage complet.  Comme les anticorps aux protéines identifient les dispositifs extérieurs de l'indigène, protéine pliée la structure indigène de la protéine étant habituellement recherchés les besoins d'être préservés, l'un ou l'autre en utilisant les sections congelées de tissu qui sont fixes seulement après que la réaction d'anticorps a été exécutée.  Quelques anticorps, cependant, lient des protéines même si ils sont dénaturés, et de tels anticorps lieront spécifiquement même à la protéine dans les sections fixes de tissu.

Le colorant fluorescent peut être en covalence attaché directement à l'anticorps spécifique, mais généralement, l'anticorps attaché est détecté par l'anti-immunoglobuline fluorescente, une technique connue sous le nom d'immunofluorescence indirecte.  Les colorants choisis pour l'immunofluroscence sont quittés par la lumière d'une longueur d'onde, habituellement bleu ou vert, et émettent la lumière d'une longueur d'onde différente dans le spectre visible.  Les colorants fluorescents les plus communs sont fluorescéine, qui emitsgreen la protéine de chlorophylle de lumière, de rouge du Texas et de Peridinn (PerCP), qui émettent la lumière rouge, et rhodamine et phycoérythrine (PE) qui émettent la lumière d'orange/red.  En utilisant les filtres sélectifs, seulement la lumière venant du colorant ou le flurochrome utilisé est détectée dans le microscope de fluorescence.  Cette technique peut être employée pour détecter la distribution de n'importe quelle protéine.  En attachant différents colorants à différents anticorps, la distribution de deux molécules ou plus peuvent être déterminés dans la même cellule ou section de tissu.

Le développement récent du microscope fluorescent confocal, qui emploie des techniques assistées par ordinateur pour produire une section optique ultra-mince d'une cellule ou d'un tissu, donne la microscopie très de haute résolution d'immunofluorescence sans besoin de préparation raffinée témoin.  La résolution du microscope confocal peut être encore augmentée en utilisant l'illumination de bas-intensité de sorte que deux photons soient exigés pour exciter le flurochrome.  Un rayon laser pulsé est utilisé, et seulement quand il est focalisé dans le plan focal des microscopeis l'intensité suffisamment pour exciter la fluorescence.  De cette façon l'émission de fluorescence elle-même peut être limitée à la section optique.

Un développement important dans la zone de la microscopie a été l'utilisation de la microscopie visuelle de temps-faute, dans laquelle les appareils-photo visuels digitaux sensibles enregistrent le mouvement des molécules fluorescently étiquetées dans des membranes de cellules et leur redistribution quand les cellules entrent en contact avec l'un l'autre.  des molécules de Cellule-surface peuvent être fluorescently étiquetées de deux voies principales.  On est par l'attache des fragments flurochrome-étiquetés de Fab des anticorps spécifiques pour la protéine de intrest ; l'autre est en produisant d'une protéine de fusion, en laquelle  la protéine de intrest a été attachée à une d'une famille des protéines fleurissantes obtenues à partir des méduses comme GFP.  La liste d'étiquettes fluorescentes disponibles inclut maintenant les protéines fluorescentes rouges, bleues, cyan ou de yellw.

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