Bibliothèques bactériophages d'affichage pour la technique et la théorie d'anticorps

Bibliothèques bactériophages d'affichage pour la production de V-région d'anticorps

Bibliothèque Bactériophage d'Affichage - Production d'Anticorps

Cette technique est utilisée pour produire anticorps-comme des molécules. Des segments de gène encodant la variable antigène-liante des domaines de V des anticorps sont fondus aux gènes encodant la protéine de manteau d'un bactériophage. Le bactériophage contenant de telles fusions de gène sont employés pour infecter des bactéries, et les particules bactériophages résultantes ont des manteaux qui expriment anticorps-comme la protéine de fusion, avec le domaine antigène-liant affiché sur l'extérieur du bateriophage.

Une collection de bactériophage de recombinaison, chacun qui affiche un domaine antigène-liant différent sur sa surface, est connue comme bibliothèque bactériophage d'affichage. Plus ou moins de la même façon que des anticorps spécifiques pour un antigène particulier peuvent être isolés dans un mélange complexe par la chromatographie d'affinité, le bactériophage exprimant des domaines antigène-liants spécifiques pour un antigène particulier peut être isolé en choisissant le bactériophage dans la bibliothèque pour lier à cet antigène. Les particules bactériophages qui lient sont récupérées et employées pour infecter les bactéries fraîches. Chacun bactériophage d'isolement de cette façon produira une particule antigène-liante monoclonale analogue à un anticorps monoclonal.

Les gènes encodant l'accepteur d'antigène, qui sont seuls à chacun bactériophage, peuvent alors être récupérés de l'ADN bactériophage et être employés pour construire des gènes pour une molécule complète d'anticorps en se joignant alors aux parties de gènes d'immunoglobuline qui encodent les parties invariables d'un anticorps. Quand ces gènes reconstruits d'anticorps sont présentés dans une ligne appropriée de cellule hôte, transfected des cellules peut sécréter des anticorps avec toutes les caractéristiques souhaitables des anticorps monoclonaux de la ligne appropriée de cellule hôte.

Plus ou moins de la même façon qu'une collection de bactériophage peut afficher une grande variété de sites antigène-liants potentiels, le bactériophage peut également être machiné pour afficher une grande variété d'antigènes ; une telle bibliothèque est connue comme bibliothèque d'affichage d'antigène. Dans ces cas-ci, l'antigène affiché sont souvent les peptides courts encodés par les ordres chimiquement synthétisés d'ADN qui ont des mélanges de chacun des quatre nucléotides dans quelques positions, de sorte que tous les acides aminés possibles soient incorporés. Il n'est pas habituel pour chaque position dans un peptide à laisser changer de cette façon, depuis le nombre de positions variables, là sont plus de 2 x 1010 ordres possibles de huit acides aminés.