Cromatografia Di Affinità - Anticorpi

Cromatografia di affinità degli anticorpi

Purificazione dell'anticorpo usando i metodi di affinità

L'anticorpo specifico può essere isolato da un antisiero. La cromatografia di affinità separa le molecole sulle loro affinità differenti per un ligand.

Questo metodo sfrutta il legame specifico dell'anticorpo all'antigene tenuto su una tabella solida. L'antigene è limitato in covalenza ai piccoli, branelli chimicamente reattivi, che sono caricati in una colonna e l'antisiero è permesso passare sopra i branelli. Gli anticorpi specifici si legano, mentre tutte le altre proteine nel siero, compreso gli anticorpi ad altre sostanze, possono essere lavate via.

Gli anticorpi specifici allora sono eluiti, tipicamente abbassando il pH a 2.5 o innalzamento notevolmente a di 11. Gli anticorpi si legano stabile nelle circostanze fisiologiche di concentrazione, della temperatura e del pH nel sale, ma il grippaggio è per quanto i legami siano rovesciabili noncovalent.

La cromatografia di affinità può anche essere usata per purificare gli antigeni dalle miscele complesse usando i branelli ricoperti d'anticorpo specifico.

La cromatografia di affinità usa il grippaggio dell'antigene-anticorpo per purificare gli antigeni o gli anticorpi. Per purificare un antigene specifico da una miscela complessa delle molecole, un anticorpo monoclonal è fissato ad una tabella insolubile, quale la cromatografia borda e la miscela delle molecole è passata sopra la tabella.

L'anticorpo specifico lega l'antigene di interesse; altre molecole sono lavate via.

L'antigene specifico allora è eluito alterando il pH, che può interrompere solitamente i legami dell'anticorpo-antigene.

Gli anticorpi possono essere purificati nello stesso modo sui branelli accoppiati all'antigene.

anticorpo di cromatografia di affinità