Radioimmunoanalisi di ELISA

Radioimmunoanalisi (RIA) ed analisi enzima-collegata dell'immunosorbente (ELISA) ed analisi competitiva di inibizione.

La radioimmunoanalisi (RIA) e l'analisi enzima-collegata dell'immunosorbente (ELISA) sono analisi obbligatorie dirette per l'anticorpo o antigene ed entrambe lavorano allo stesso principio, ma il mezzo di rilevazione del grippaggio di specific è differente. Le radioimmunoanalisi sono comunemente usate misurare i livelli di ormoni in anima e liquidi intercellulari, mentre le analisi di ELISA sono utilizzate frequentemente nei sistemi diagnostici virali. Per sia questi metodi uno ha bisogno di una preparazione pura di un antigene conosciuto o l'anticorpo, o entrambi, per standardizzare l'analisi. Questa analisi sarà descritta con un campione dell'anticorpo puro, ma il principio è simile se l'antigene puro è usato preferibilmente. In RIA per un antigene, l'anticorpo puro contro quell'antigene è contrassegnato radioattivo, solitamente con 125I; per il ELISA, un enzima è collegato chimicamente all'anticorpo. La componente adenoida, che in questo caso sarebbe antigene, è attaccata ad un supporto solido, quali i pozzi di un piatto di plastica del multiwell, che assorbirà una certa somma di tutta la proteina.

L'anticorpo contrassegnato è permesso legare all'antigene adenoide, nelle circostanze dove l'assorbimento non specifico è ostruito e tutto l'anticorpo non legato ed altre proteine sono lavati via.

L'anticorpo che lega a RIA è misurato direttamente in termini di quantità di radioattività mantenuta dai pozzi rivestiti, mentre in Elisa, legante è rilevato da una reazione che converte un substrato incolore in prodotto di reazione al colore. Il cambiamento di colore può essere letto direttamente nel cassetto di reazione, rendendo la raccolta di dati molto facile e ELISA egualmente evita i rischi di radioattività. Ciò rende a ELISA il metodo preferito per più analisi obbligatorie dirette.

Gli anticorpi contrassegnati dell'anti-immunoglobulina possono anche essere utilizzati in RIA o in ELISA per rilevare il legame dell'anticorpo adenoide ai piatti antigene-rivestiti adenoidi. In questo caso, l'anticorpo contrassegnato dell'anti-immunoglobulina è utilizzato in che cosa è chiamato un `secondi layer'. L'uso di un secondo strato egualmente amplifica il segnale, poichè almeno due molecole dell'anticorpo contrassegnato dell'anti-immunoglobina possono legare ad ogni anticorpo adenoide. RIA e ELISA possono anche essere effettuati con l'anticorpo adenoide attaccato sui piatti e sull'antigene contrassegnato aggiunti.

Figura: Il principio dell'enzima ha collegato l'analisi dell'immunosorbente (ELISA)

elisa

Per rilevare l'antigene A, lo specific purificato dell'anticorpo per l'antigene A è collegato chimicamente ad un enzima. I campioni da provare sono rivestiti sulla superficie dei pozzi di plastica a cui legano non specifico. I luoghi appiccicosi residui sulla plastica sono ostruiti aggiungendo le proteine irrilevanti (non indicate). L'anticorpo contrassegnato allora si aggiunge ai pozzi nelle circostanze dove grippaggio non specifico