Tecnica e teoria di radioimmunoanalisi di ELISA

Radioimmunoanalisi di ELISA

Radioimmunoanalisi (RIA) ed analisi enzima-collegata dell'immunosorbente (ELISA) ed analisi competitiva di inibizione.

La radioimmunoanalisi (RIA) e l'analisi enzima-collegata dell'immunosorbente (ELISA) sono analisi obbligatorie dirette per l'anticorpo o antigene ed entrambe lavorano allo stesso principio, ma il mezzo di rilevazione del grippaggio specifico è differente. Le radioimmunoanalisi sono usate comunemente per misurare i livelli degli ormoni in anima e liquidi intercellulari, mentre le analisi di ELISA sono usate frequentemente nel sistema diagnostico virale. Per sia questi metodi uno ha bisogno di una preparazione pura di un antigene conosciuto o l'anticorpo, o entrambi, per standardizzare l'analisi. Questa analisi sarà descritta con un campione dell'anticorpo puro, ma il principio è simile se l'antigene puro è usato preferibilmente. In RIA per un antigene, l'anticorpo puro contro quell'antigene è identificato radioattivo, solitamente con 125I; per il ELISA, un enzima è collegato chimicamente all'anticorpo. Il componente adenoide, che in questo caso sarebbe antigene, è fissato ad un supporto solido, quali i pozzi di una piastra di plastica del multiwell, che assorbirà una determinata quantità di tutta la proteina.

L'anticorpo identificato è permesso legarsi all'antigene adenoide, nelle circostanze dove l'assorbimento non specifico è ostruito e tutto l'anticorpo non legato ed altre proteine sono lavati via.

L'anticorpo che si lega a RIA è misurato direttamente in termini di quantità di radioattività mantenuta dai pozzi rivestiti, mentre in Elisa, legantesi è rilevato da una reazione che converte un substrato incolore in prodotto colorato di reazione. Il cambiamento di colore può essere letto direttamente nel cassetto di reazione, rendendo la raccolta di dati molto facile ed ELISA egualmente evita i rischi di radioattività. Ciò rende a ELISA il metodo preferito per più analisi obbligatorie dirette.

Gli anticorpi identificati dell'anti-immunoglobulina possono anche essere usati in RIA o in ELISA per rilevare il legame dell'anticorpo adenoide alle piastre antigene-rivestite adenoide. In questo caso, l'anticorpo identificato dell'anti-immunoglobulina è usato in che cosa è chiamato ‘un secondo strato’. L'uso di un secondo strato egualmente amplifica il segnale, poichè almeno due molecole dell'anticorpo identificato del anti-immunoglobin possono legarsi ad ogni anticorpo adenoide. RIA ed ELISA possono anche essere effettuati con l'anticorpo adenoide attaccato sulle piastre e sull'antigene identificato aggiunti.

Figura: Il principio dell'enzima ha collegato l'analisi dell'immunosorbente (ELISA)

elisa

Per rilevare l'antigene A, l'anticorpo purificato specifico per l'antigene A è collegato chimicamente ad un enzima. I campioni da esaminare sono rivestiti sulla superficie dei pozzi di plastica a cui si legano nonspecifically. I luoghi appiccicosi residui sulla plastica sono ostruiti aggiungendo le proteine irrilevanti (non indicate). L'anticorpo identificato allora è aggiunto ai pozzi nelle circostanze dove grippaggio non specifico