Librerie dei fagi della visualizzazione per la tecnica e la teoria dell'anticorpo

Librerie dei fagi della visualizzazione per produzione di V-regione dell'anticorpo

Libreria Dei fagi Della Visualizzazione - Produzione Dell'Anticorpo

Questa tecnica è usata per produrre anticorpo-come le molecole. I segmenti del gene che mettono la variabile in codice antigene-legantesi dei settori di V degli anticorpi sono fusi ai geni che mettono la proteina in codice del cappotto di un batteriofago. Il batteriofago che contiene tali fusioni del gene è usato per infettare i batteri e le particelle dei fagi risultanti hanno cappotti che esprimono anticorpo-come la proteina di fusione, con il settore antigene-legantesi visualizzato sulla parte esterna del bateriophage.

Una collezione di fago recombinant, ciascuno che visualizza un settore antigene-legantesi differente sulla relativa superficie, è conosciuta come libreria dei fagi della visualizzazione. Più o meno allo stesso modo che gli anticorpi specifici per un antigene particolare possono essere isolati da una miscela complessa dalla cromatografia di affinità, il fago che esprime i settori antigene-legantesi specifici per un antigene particolare può essere isolato selezionando il fago nella libreria per legarsi a quell'antigene. Le particelle dei fagi che si legano sono recuperate ed usate per infettare i batteri freschi. Ciascuno dei fagi isolato in questo modo produrrà una particella antigene-legantesi monoclonal analoga ad un anticorpo monoclonal.

I geni che mettono il luogo in codice obbligatorio dell'antigene, che sono unici a ciascuno dei fagi, possono allora essere recuperati dal DNA dei fagi ed essere usati per costruire i geni per una molecola completa dell'anticorpo unendosi allora alle parti dei geni dell'immunoglobulina che mettono le parti in codice invariabili di un anticorpo. Quando questi geni ricostruiti dell'anticorpo sono introdotti in una riga adatta della cellula ospite, transfected le cellule può secernere gli anticorpi con tutte le caratteristiche desiderabili degli anticorpi monoclonal della riga adatta della cellula ospite.

Più o meno allo stesso modo che una collezione di fago può visualizzare un'ampia varietà di luoghi antigene-legantesi potenziali, il fago può anche essere costruito per visualizzare un'ampia varietà di antigeni; una tal libreria è conosciuta come libreria della visualizzazione dell'antigene. In tali casi, l'antigene visualizzato è spesso peptidi corti messi dalle sequenze chimicamente sintetizzate del DNA che hanno miscele di tutti e quattro i nucleotidi in alcune posizioni, di modo che tutti gli amminoacidi possibili sono incorporati. Non è usuale per ogni posizione in un peptide da concedersi variare in questo modo, dal numero di posizioni variabili, là è oltre 2 x 1010 sequenze possibili di otto amminoacidi.