Radioimmunoanalyses ELISA

Auteursrecht 2006 - AntibodyStation.

Radioimmunoanalyse (RIA), en enzym-verbonden immunosorbent analyse (ELISA), en concurrerende remmingsanalyse.

De radioimmunoanalyse (RIA) en de enzym-verbonden immunosorbent analyse (ELISA) zijn directe bindende analyses voor antilichaam of antigeen en beide werk aangaande het zelfde principe, maar het middel om specifieke band te ontdekken is verschillend.  De radioimmunoanalyses worden algemeen gebruikt om de niveaus van hormonen in bloed en weefselvloeistoffen te meten, terwijl de analyses ELISA vaak in virale diagnostiek worden gebruikt.  Voor zowel deze methodes vergt men een zuivere voorbereiding van een bekend antigeen of een antilichaam, of allebei om de analyse te standaardiseren.  Deze analyse zal met een steekproef van zuiver antilichaam worden beschreven, maar het principe is gelijkaardig als het zuivere antigeen in plaats daarvan wordt gebruikt.  In RIA voor een antigeen, wordt het zuivere antilichaam tegen dat antigeen radioactief geëtiketteerdu, gewoonlijk met 125I; voor ELISA, is een enzym chemisch verbonden met het antilichaam.  De component zonder etiket, die in dit geval antigeen zou zijn, is in bijlage aan een stevige steun, zoals de putten van een plastic multiwell plaat, die een bepaalde hoeveelheid van om het even welke proteïne zal absorberen.  

Het geëtiketteerdee antilichaam wordt toegestaan om aan het antigeen zonder etiket, in de omstandigheden te binden waar de niet-specifieke absorptie wordt geblokkeerd, en om het even welk unbound antilichaam en andere proteïnen worden gereinigd.

Het antilichaam dat aan RIA bindt wordt direct in termen van de hoeveelheid radioactiviteit gemeten die door de met een laag bedekte putten wordt behouden, terwijl in Elisa, het binden door een reactie wordt ontdekt die een kleurloos substraat in een gekleurde reactieproduct omzet.  De kleurenverandering kan direct worden gelezen in het reactiedienblad, makend gegevensinzameling zeer gemakkelijk, en ELISA vermijdt ook de gevaren van radioactiviteit.  Dit maakt tot ELISA de aangewezen methode voor directere bindende analyses.

De geëtiketteerdec anti-immunoglobulinantilichamen kunnen ook in RIA of ELISA worden gebruikt om band van antilichaam zonder etiket aan antigeen-met een laag bedekte platen zonder etiket te ontdekken.  In dit geval, wordt het geëtiketteerdee anti-immunoglobulinantilichaam gebruikt in wat een tweede laag `' wordt genoemd.  Het gebruik van een tweede laag vergroot ook het signaal, aangezien minstens twee molecules van het geëtiketteerdei anti-immunoglobinantilichaam aan elk antilichaam zonder etiket kunnen binden.  RIA en ELISA kunnen ook met antilichaam zonder etiket worden uitgevoerd dat op de toegevoegde platen en het geëtiketteerdee antigeen wordt geplakt.

Cijfer:  Het principe van het enzym verbond immunosorbent analyse (ELISA)

Om antigeen A te ontdekken, is het gezuiverde antilichaam specifiek voor antigeen A chemisch verbonden met een enzym.  De te testen steekproeven zijn met een laag bedekt op de oppervlakte van plastic putten waaraan zij nonspecifically binden. De overblijvende kleverige plaatsen op het plastiek worden geblokkeerd door onbelangrijke getoonde niet proteïnen () toe te voegen.  Het geëtiketteerdee antilichaam wordt dan toegevoegd aan de putten in de omstandigheden waar niet specifieke band  

Auteursrecht 2006 - 2007 - AntibodyStation.