De Microscopie van de immunofluorescentie

Leer over de Microscopie van de Immunofluorescentie

De antilichamen binden stabiel en specifiek aan hun overeenkomstig antigeen, zijn zij onschatbaar als sondes voor het identificeren van een bepaalde molecule in cellen, weefsels, of weefsels, of biologische vloeistoffen.  De molecules van het antilichaam kunnen om van hun doelmolecules in enige cellen of in weefselsecties nauwkeurig de plaats te bepalen door een verscheidenheid van verschillende etiketteringstechnieken worden gebruikt.  Wanneer het antilichaam zelf, of het antiimmunoglobulinantilichaam dat wordt gebruikt om te ontdekken het met een fluorescente kleurstof worden geëtiketteerde is de techniek genoemd geworden immunoflurescencemicroscopie.  Zoals in alle serologische technieken, bindt het antilichaam stabiel aan zijn antigeen, toelatend unbound antilichaam om door grondige was worden verwijderd.  Aangezien de antilichamen aan proteïnen de oppervlakteeigenschappen van de inwoner erkennen, moet de gevouwen proteïne de inheemse structuur van de proteïne die gewoonlijk worden bewaard, één van beiden door bevroren weefselsecties wordt gezocht te gebruiken die worden bevestigd slechts nadat de antilichamenreactie is uitgevoerd.  Sommige antilichamen, echter, binden proteïnen zelfs als zij worden gedenatureerd, en dergelijke antilichamen zullen specifiek zelfs aan proteïne in vaste weefselsecties binden.

De fluorescente kleurstof kan covalent rechtstreeks aan het specifieke antilichaam worden vastgemaakt, maar meer in het algemeen, wordt het verbindende antilichaam ontdekt door fluorescente anti-immunoglobulin, een techniek die als indirecte immunofluorescentie wordt bekend.  De kleurstoffen die voor immunofluroscence worden gekozen zijn weggegaan door licht van één golflengte, gewoonlijk blauw of groen, en uitzenden licht van een verschillende golflengte in het zichtbare spectrum.  De gemeenschappelijkste fluorescente kleurstoffen zijn fluoresceïne, die licht, het Rood van Texas en Peridinn chlorofylproteïne (PerCP) emitsgreen, die rood licht uitzenden, en rodamine en phycoerythrin (PE) die oranje/rood licht uitzenden.  Door selectieve filters te gebruiken, slechts wordt het uit de kleurstof komt of flurochrome gebruikte licht dat ontdekt in de fluorescentiemicroscoop.  Deze techniek kan worden gebruikt om de distributie van om het even welke proteïne te ontdekken.  Door verschillende kleurstoffen aan verschillende antilichamen vast te maken, kan de distributie van twee of meer molecules in de zelfde cel of weefselsectie worden bepaald.

De recente ontwikkeling van de confocal fluorescente microscoop, die technieken met computer gebruikt om een uiterst dunne optische sectie van een cel of een weefsel te veroorzaken, geeft de microscopie van de zeer hoge resolutieimmunofluorescentie zonder de behoefte aan gedetailleerde steekproefvoorbereiding.  De resolutie van de confocal microscoop kan verder worden verhoogd gebruikend laag-intensiteitsverlichting zodat twee fotonen worden vereist om flurochrome op te wekken.  Een gepulseerde laserstraal wordt gebruikt, en slechts wanneer het in het brandpuntsvliegtuig van microscopeis de intensiteit voldoende wordt geconcentreerd om fluorescentie op te wekken.  Op deze wijze kan de fluorescentieemissie zelf tot de optische sectie worden beperkt.

Één belangrijke ontwikkeling op het gebied van de microscopie is het gebruik van de tijd-tijdspanne videomicroscopie geweest, waarin de gevoelige digitale videocamera's de beweging van fluorescently geëtiketteerde molecules in celmembranen en hun herdistributie registreren wanneer de cellen in contact met elkaar komen.  De cel-oppervlakte molecules kunnen fluorescently op twee belangrijke manieren worden geëtiketteerde.  Men is door de band van flurochrome-geëtiketteerden fragmenten Fab van antilichamen specifiek voor de proteïne van belang; andere is door een fusieproteïne te produceren, waarin de proteïne van belang is vastgemaakt aan één van een familie van fluorescente proteïnen die uit kwallen zoals GFP worden verkregen.  De lijst van beschikbare fluorescente etiketten omvat nu rode, blauwe, cyaan of yellw fluorescente proteïnen.

Auteursrecht 2006 - AntibodyStation.