ELISA Radioimmunoassay Technique and Theory Elisa Radioimmunoassay Teknikk og teori

ELISA Radioimmunoassays Elisa Radioimmunoassays

Radioimmunoassay (RIA), and enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), and competitive inhibition assay. Radioimmunoassay (RIA), og enzym-tilknyttede immunosorbent analysen (Elisa) og konkurrerende hemming analysen.

Radioimmunoassay (RIA) and enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) are direct binding assays for antibody or antigen and both work on the same principle, but the means of detecting specific binding is different. Radioimmunoassays are commonly used to measure the levels of hormones in blood and tissue fluids, while ELISA assays are frequently used in viral diagnostics. For both these methods one needs a pure preparation of a known antigen or antibody, or both, in order to standardize the assay. This assay will be described with a sample of pure antibody, but the principle is similar if pure antigen is used instead. In RIA for an antigen, pure antibody against that antigen is radioactively labeled, usually with 125I; for the ELISA, an enzyme is linked chemically to the antibody. The unlabeled component, which in this case would be antigen, is attached to a solid support, such as the wells of a plastic multiwell plate, which will absorb a certain amount of any protein. Radioimmunoassay (RIA) og enzym-tilknyttede immunosorbent analysen (Elisa) er direkte bindende essay av antistoff eller antigen og både arbeid på samme prinsipp, men midlene til å oppdage spesifikke bindende er annerledes. Radioimmunoassays er vanligvis brukes til å måle nivåer av hormoner i blod og vev væsker, mens Elisa essay er ofte brukt i viral diagnostikk. For begge disse metodene man har behov for en ren forberedelse av et kjent antigen eller antistoff, eller begge deler, for å standardisere den analysen. Denne analysen vil bli beskrevet med et utvalg av rene antistoffer, men prinsippet er det samme hvis ren antigen brukes i stedet. RIA for et antigen, rene antistoffer mot det antigen er radioactively merket, vanligvis med 125I, for Elisa, et enzym er tilknyttet kjemisk til antistoffet. umerket komponent , Som i dette tilfellet ville være antigen er festet til en solid støtte, for eksempel brønner i en plastpose multiwell plate, som vil absorbere en viss mengde av noe protein.

The labeled antibody is allowed to bind to the unlabeled antigen, under conditions where nonspecific absorption is blocked, and any unbound antibody and other proteins are washed away. Det merket antistoff er tillatt å binde til umerket antigen, under betingelser der nonspecific absorpsjon er blokkert, og eventuelle ubundet antistoffer og andre proteiner er vasket bort.

Antibody binding to RIA is measured directly in terms of the amount of radioactivity retained by the coated wells, whereas in Elisa, binding is detected by a reaction that converts a colorless substrate into a colored reaction product. The color change can be read directly in the reaction tray, making data collection very easy, and ELISA also avoids the hazards of radioactivity. This makes ELISA the preferred method for more direct binding assays. Antibody binding til RIA måles direkte når det gjelder mengden radioaktivitet beholdes av den belagte brønner, mens i Elisa, innbinding er oppdaget av en reaksjon som konverterer en colorless underlaget i en farget reaksjon produktet. Fargeendring kan leses direkte i reaksjon skuffen, slik at datainnsamling svært enkelt, og Elisa også unngår de farer av radioaktivitet. Dette gjør Elisa den foretrukne metoden for mer direkte bindende essay.

Labeled anti-immunoglobulin anti-bodies can also be used in RIA or ELISA to detect binding of unlabeled antibody to unlabeled antigen-coated plates. In this case, the labeled anti-immunoglobulin antibody is used in what is termed a ‘second layer’. The use of a second layer also amplifies the signal, as at least two molecules of the labeled anti-immunoglobin antibody are able to bind to each unlabeled antibody. RIA and ELISA can also be carried out with unlabelled antibody stuck on the plates and labeled antigen added. Merket anti-immunoglobulin anti-organer kan også bli brukt i RIA eller Elisa til å gjenkjenne bindende for umerket antistoff til umerket antigen-belagte plater. I dette tilfellet er merket anti-immunoglobulin antistoffet er brukt i det som er kalt en "andre lag". Bruk av andre lag også forsterker signalet, som minst to molekyler av merket anti-immunoglobin antistoffet er i stand til å binde til hver umerket antistoff. RIA og Elisa kan også være utført med unlabelled antistoffet fast på platene og merket antigen lagt.

Figure: The principle of the enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) Figur: Prinsippet for enzymet knyttet immunosorbent analysen (Elisa)

elisjon

To detect antigen A, purified antibody specific for antigen A is linked chemically to an enzyme. The samples to be tested are coated onto the surface of plastic wells to which they bind nonspecifically. For å oppdage antigen A, renset antistoffer spesifikke for antigen A er tilknyttet kjemisk til et enzym. Vareprøver til å bli testet er belagt på overflaten av plast brønner som de bind nonspecifically. Residual sticky sites on the plastic are blocked by adding irrelevant proteins (not shown). The labeled antibody is then added to the wells under conditions where non specific binding Resterende klebrig områder på plast er blokkert ved å legge irrelevante proteiner (ikke vist). Merket antistoff er deretter lagt til brønnene under forhold hvor ingen spesifikke bindende