Phage Display Libraries for Antibody Technique and Theory Phage Display Libraries for Antibody Teknikk og teori

Phage Display Libraries for Antibody V-region Production Phage Display Libraries for Antibody V-regionen Produksjon

Phage Display Library - Antibody Production Phage Display Bibliotek - Antibody Production

This technique is used for producing antibody-like molecules. Gene segments encoding the antigen-binding variable of V domains of antibodies are fused to genes encoding the coat protein of a bacteriophage. Bacteriophage containing such gene fusions are used to infect bacteria, and the resulting phage particles have coats that express the antibody-like fusion protein, with the antigen-binding domain displayed on the outside of the bateriophage. Denne teknikken er brukt for å produsere antistoff-liknende molekyler. Gene segmenter koding av antigen-bindende variabel av V domener av antistoffer er smeltet til gener koder for proteiner frakk av en bacteriophage. Bacteriophage inneholder slike gene fusions brukes til å infisere bakterier, og resultatet Phage partikler har strøk som uttrykk for antistoff-like fusion protein, med antigen-bindende domene som vises på utsiden av bateriophage.

A collection of recombinant phage, each displaying a different antigen-binding domain on its surface, is known as a phage display library. In much the same way that antibodies specific for a particular antigen can be isolated from a complex mixture by affinity chromatography, phage expressing antigen-binding domains specific for a particular antigen can be isolated by selecting the phage in the library for binding to that antigen. The phage particles that bind are recovered and used to infect fresh bacteria. Each phage isolated in this way will produce a monoclonal antigen-binding particle analogous to a monoclonal antibody. En samling av rekombinante Phage, hver viser en annen antigen-bindende domene på overflaten, er kjent som en Phage display biblioteket. Mye på samme måte som antistoffer spesifikke for en bestemt antigen kan være isolert fra en kompleks blanding av tilhørighet chromatography, Phage uttrykker antigen-bindende domener spesifikke for en bestemt antigen kan bli isolert ved å velge Phage i biblioteket til innbinding til at antigen. Phage partikler som binder utvinnes og brukes til å infisere friskt bakterier. Hver Phage isolert på denne måten vil produsere en monoclonal antigen-bindende partikkel analog til en monoclonal antistoffer.

The genes encoding the antigen binding site, which are unique to each phage, can then be recovered from the phage DNA and used to construct genes for a complete antibody molecule by joining then to parts of immunoglobulin genes that encode the invariant parts of the an antibody. When these reconstructed antibody genes are introduced into a suitable host cell line, the transfected cells can secrete antibodies with all the desirable characteristics of monoclonal antibodies of the suitable host cell line. Genene koder for antigen bindende området, som er unike for hver Phage, deretter kan utvinnes fra Phage DNA og brukes til å konstruere gener for en komplett antistoff molekylet ved begynte deretter til deler av immunoglobulin gener som koder det invariant deler av en antistoff . Når disse rekonstruert antistoffet gener er innført i en passende vert celle linje, transfected celler kan utsondre antistoffer med all ønskelig characteristics of monoclonal antistoffer av egnet vert celle linje.

In much the same way that a collection of phage can display a wide variety of potential antigen-binding sites, the phage can also be engineered to display a wide variety of antigens; such a library is known as an antigen display library. In such cases, the antigen displayed are often short peptides encoded by chemically synthesized DNA sequences that have mixtures of all four nucleotides in some positions, so that all possible amino acids are incorporated. It is not usual for every position in a peptide to be allowed to vary in this way, since the number of variable positions, there are over 2 x 1010 possible sequences of eight amino acids. I mye på samme måte som en samling av Phage kan vise et bredt spekter av potensielle antigen-bindende områder, Phage kan også være konstruert for å vise et bredt spekter av antigener; et slikt bibliotek er kjent som et antigen vise biblioteket. I slike tilfeller , Antigen vises er ofte korte peptides kodet av kjemisk syntetiserte DNA-sekvenser som har blandinger av alle fire nucleotides i enkelte stillinger, slik at alle mulige aminosyrer er innarbeidet. Det er ikke vanlig for hver stilling i en Peptid å få lov til å variere i denne måten, ettersom antall variable posisjoner, det er over 2 x 1010 mulige sekvenser av åtte aminosyrer.