Affinity Chromatography - Antibodies Affinity Chromatography - Przeciwciała

Affinity Chromatography of Antibodies Affinity Chromatography przeciwciał

Purification of Antibody using Affinity Methods Oczyszczanie za pomocą przeciwciała Affinity Metody

Specific antibody can be isolated from an antiserum. Affinity Chromatography separates molecules on their differing affinities for a ligand. Specyficzne przeciwciała mogą być izolowane z surowicy. Affinity Chromatography oddziela cząsteczki na ich różne powiązane na ligand.

This method exploits the specific binding of antibody to antigen held on a solid matrix. Antigen is bound covalently to small, chemically reactive beads, which are loaded into a column, and the antiserum is allowed to pass over the beads. Metoda ta wykorzystuje specyficzne wiązanie przeciwciał do antygenów, która odbyła się na stałe matrycy. Antygenu związane kowalencyjnie związana jest do małych, chemicznie reaktywne perełki, które są ładowane w kolumnie i surowicy jest dozwolone, aby przejść do perełek. The specific antibodies bind, while all the other proteins in the serum, including the antibodies to other substances, can be washed away. W specyficznych przeciwciał wiążące, natomiast wszystkie inne białka w surowicy, w tym przeciwciał dla innych substancji, mogą być myte away.

The specific antibodies are then eluted, typically by lowering the pH to 2.5 or raising it to greater than 11. Antibodies bind stably under physiological conditions of salt concentration, temperature, and pH, but the binding is reversible as the bonds are noncovalent. W specyficznych przeciwciał są następnie poddawane eluacji, zazwyczaj poprzez obniżenie pH do 2,5 lub podniesienie go do większego niż 11. Przeciwciała wiążą stabilnie pod warunkach fizjologicznych stężenie soli, temperatura, pH, ale wiąże się odwracalne jak obligacje są noncovalent.

Affinity chromatography can also be used to purify antigens from complex mixtures by using beads coated with specific antibody. Affinity chromatografii mogą być również wykorzystywane do oczyścić antygenów złożonych z mieszaniny za pomocą kulki pokryte specyficzne przeciwciała.

Affinity chromatography uses antigen-antibody binding to purify antigens or antibodies. To purify a specific antigen from a complex mixture of molecules, a monoclonal antibody is attached to an insoluble matrix, such as chromatography beads, and the mixture of molecules is passed over the matrix. Affinity chromatografii wykorzystuje antygen-przeciwciało wiąże się oczyścić antygenów lub przeciwciał. Oczyścić konkretnego kompleksu antygenu z mieszaniny cząsteczek, przeciwciało monoklonalne jest załączony do macierzy nierozpuszczalne, takie jak chromatografia kulek i mieszaniny cząsteczek jest przekazywana w ciągu macierzy .

The specific antibody binds the antigen of interest; other molecules are washed away. Specyficzne przeciwciała wiąże się z antygenem interesów; innych molekuł są myte away.

Specific antigen is then eluted by altering the pH, which can usually disrupt antibody-antigen bonds. Szczególne antygenu jest następnie poddawane eluacji poprzez zmiany pH, które mogą zakłócić zwykle obligacji antygen-przeciwciało.

Antibodies can be purified in the same way on beads coupled to antigen. Przeciwciała mogą być oczyszczane w taki sam sposób, w połączeniu z perełek antygenów.

chromatografii powinowactwa przeciwciał