ELISA Radioimmunoassay Technique and Theory ELISA Radioimmunoassay Teoria i technika

ELISA Radioimmunoassays ELISA Radioimmunoassays

Radioimmunoassay (RIA), and enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), and competitive inhibition assay. Radioimmunoassay (RIA), enzymu związane immunosorbent assay (ELISA), oraz konkurencyjne teście hamowania.

Radioimmunoassay (RIA) and enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) are direct binding assays for antibody or antigen and both work on the same principle, but the means of detecting specific binding is different. Radioimmunoassays are commonly used to measure the levels of hormones in blood and tissue fluids, while ELISA assays are frequently used in viral diagnostics. For both these methods one needs a pure preparation of a known antigen or antibody, or both, in order to standardize the assay. This assay will be described with a sample of pure antibody, but the principle is similar if pure antigen is used instead. In RIA for an antigen, pure antibody against that antigen is radioactively labeled, usually with 125I; for the ELISA, an enzyme is linked chemically to the antibody. The unlabeled component, which in this case would be antigen, is attached to a solid support, such as the wells of a plastic multiwell plate, which will absorb a certain amount of any protein. Radioimmunoassay (RIA) oraz enzymu związane immunosorbent assay (ELISA) są wiążące bezpośrednich analiz dla przeciwciał lub antygenów, jak i pracy na tej samej zasadzie, ale oznacza wykrywania wiązania jest inny. Radioimmunoassays są powszechnie stosowane do pomiaru poziomu hormonów w krwi, tkanek i płynów, natomiast testy ELISA są często stosowane w diagnostyce wirusowej. obu tych metod należy czystym przygotowania znanego antygenu lub przeciwciała, lub oba, w celu ujednolicenia w teście. teście zostaną opisane w próbce czystego przeciwciała, ale zasada jest podobna, jeśli jest używana czysta antygenu. W RIA na antygen, przeciwciała przeciwko czystej że antygen jest radioaktywnie oznaczone, zazwyczaj z 125I; dla ELISA, enzymu związana jest chemicznie do przeciwciał. komponent bez etykiety , Która w tym przypadku byłoby antygenu, jest załączony do silnego wsparcia, takich jak studnie z tworzyw sztucznych multiwell tablicy, które pochłaniają pewną kwotę każde białko.

The labeled antibody is allowed to bind to the unlabeled antigen, under conditions where nonspecific absorption is blocked, and any unbound antibody and other proteins are washed away. W przeciwciało oznaczone jest możliwość wiążą się z antygenem bez etykiety, w warunkach, gdy nonspecific absorpcji jest zablokowane, a wszelkie niezwiązanego przeciwciała i inne białka są myte away.

Antibody binding to RIA is measured directly in terms of the amount of radioactivity retained by the coated wells, whereas in Elisa, binding is detected by a reaction that converts a colorless substrate into a colored reaction product. The color change can be read directly in the reaction tray, making data collection very easy, and ELISA also avoids the hazards of radioactivity. This makes ELISA the preferred method for more direct binding assays. Przeciwciało wiążące do RIA jest mierzona bezpośrednio pod względem ilości radioaktywności zatrzymywane przez powlekane studni, w Elisa, wiążąca jest wykrywane przez reakcji, które przekształca bezbarwna substrat do barwnego produktu reakcji. Zmienić kolor można odczytać bezpośrednio w reakcji płytki, dzięki czemu bardzo łatwo zbierania danych, a także ELISA unika niebezpieczeństw radioaktywności. To sprawia, że preferowaną metodą ELISA dla bardziej bezpośredniego wiąże analiz.

Labeled anti-immunoglobulin anti-bodies can also be used in RIA or ELISA to detect binding of unlabeled antibody to unlabeled antigen-coated plates. In this case, the labeled anti-immunoglobulin antibody is used in what is termed a ‘second layer’. The use of a second layer also amplifies the signal, as at least two molecules of the labeled anti-immunoglobin antibody are able to bind to each unlabeled antibody. RIA and ELISA can also be carried out with unlabelled antibody stuck on the plates and labeled antigen added. Etykiecie immunoglobuliny anty-anty-organy mogą również zostać wykorzystane w RIA lub ELISA do wykrywania przeciwciał wiązanie bez etykiety bez etykiety do antygenu powlekane płytki. W tym przypadku, oznaczone immunoglobuliny anty-przeciwciało jest używany w to, co jest określane jako "druga warstwa". Korzystanie z drugą warstwę także wzmacnia sygnał, jak co najmniej dwóch cząsteczek z etykietą przeciwciał anty-immunoglobin są zdolne do wiązania przeciwciał dla każdego bez etykiety. RIA i ELISA może być również przeprowadzona z nieetykietowane przeciwciało utkniesz na płyty i oznaczone jako antygen dodaje.

Figure: The principle of the enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) Rysunek: Zasada enzymu związane immunosorbent assay (ELISA)

elisa

To detect antigen A, purified antibody specific for antigen A is linked chemically to an enzyme. The samples to be tested are coated onto the surface of plastic wells to which they bind nonspecifically. Aby wykryć antygen A, oczyszczone przeciwciała specyficzne dla antygenów A jest związane chemicznie do enzymu. Próbek, które mają być testowane są powlekane na powierzchni z tworzyw sztucznych do studzienek, które wiążą nonspecifically. Residual sticky sites on the plastic are blocked by adding irrelevant proteins (not shown). The labeled antibody is then added to the wells under conditions where non specific binding Pozostała przyklejony na witrynach z tworzyw sztucznych są blokowane przez dodanie nieodpowiednich białek (nie pokazano). Przeciwciało oznaczone są następnie dodawane do studni w warunkach szczególnych, gdy nie wiąże