Radioimmunoassays de ELISA

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Radioimmunoassay (RIA), e ensaio enzima-lig da imunoabsorção (ELISA), e ensaio do competidor da inibição.

O Radioimmunoassay (RIA) e o ensaio enzima-lig da imunoabsorção (ELISA) são ensaios obrigatórios diretos para o anticorpo ou o antígeno e ambos trabalham no mesmo princípio, mas os meios de detectar o emperramento específico são diferentes.  Os Radioimmunoassays são de uso geral medir os níveis de hormonas no sangue e nos líquidos de tecido, quando os ensaios de ELISA forem usados freqüentemente em diagnósticos virais.  Para estes métodos um precisa uma preparação pura de um antígeno conhecido ou anticorpo, ou ambos, a fim estandardizar o ensaio.  Este ensaio será descrito com uma amostra de anticorpo puro, mas o princípio é similar se o antígeno puro é usado preferivelmente.  Em RIA para um antígeno, o anticorpo puro de encontro a esse antígeno é etiquetado radioativa, geralmente com 125I; para o ELISA, uma enzima é lig quimicamente ao anticorpo.  O componente unlabeled, que neste caso seria antígeno, é anexado a uma sustentação contínua, tal como os poços de uma placa plástica do multiwell, que absorva uma determinada quantia de toda a proteína.  

O anticorpo etiquetado é permitido ligar ao antígeno unlabeled, sob as circunstâncias onde a absorção não específica é obstruída, e todo o anticorpo unbound e outras proteínas são lavados afastado.

O anticorpo que liga a RIA é medido diretamente nos termos da quantidade de radioactividade retida pelos poços revestidos, visto que em Elisa, ligando é detectado por uma reação que converta uma carcaça incolor em um produto da reação colorida.  A mudança da cor pode ser lida diretamente na bandeja da reação, fazendo o levantamento de dados muito fácil, e ELISA igualmente evita os perigos da radioactividade.  Isto faz a ELISA o método preferido para mais ensaios obrigatórios diretos.

Os anticorpos etiquetados da anti-imunoglobulina podem igualmente ser usados em RIA ou em ELISA para detectar o emperramento do anticorpo unlabeled às placas antígeno-revestidas unlabeled.  Neste caso, o anticorpo etiquetado da anti-imunoglobulina é usado em o que é denominado um `segundos layer'.  O uso de uma segunda camada igualmente amplifica o sinal, porque pelo menos duas moléculas do anticorpo etiquetado da anti-imunoglobina podem ligar a cada anticorpo unlabeled.  RIA e ELISA podem igualmente ser realizados com o anticorpo unlabelled furado nas placas e no antígeno etiquetado adicionados.

Figura:  O princípio da enzima lig o ensaio da imunoabsorção (ELISA)

Para detectar o antígeno A, o específico purified do anticorpo para o antígeno A é lig quimicamente a uma enzima.  As amostras a seas sido revestidas na superfície dos poços plásticos a que ligam não especìfica. Os locais pegajosos residuais no plástico são obstruídos adicionando as proteínas irrelevantes (não mostradas).  O anticorpo etiquetado é adicionado então aos poços sob as circunstâncias onde emperramento não específico  

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