Bibliotecas phage do indicador para a técnica e a teoria do antibody

Bibliotecas phage do indicador para a produção da V-região do antibody

Biblioteca Phage Do Indicador - Produção Do Antibody

Esta técnica é usada produzindo antibody-como moléculas. Os segmentos do gene que codificam a variável antígeno-ligando de domínios de V dos antibodies são fundidos aos genes que codificam a proteína do revestimento de um bacteriófago. O bacteriófago que contem tais fusões do gene é usado infect as bactérias, e as partículas phage resultantes têm os revestimentos que expressam antibody-como a proteína da fusão, com o domínio antígeno-ligando indicado na parte externa do bateriophage.

Uma coleção do phage recombinant, cada um que indica um domínio antígeno-ligando diferente em sua superfície, é sabida como uma biblioteca phage do indicador. No muito a mesma maneira que os antibodies específicos para um antígeno particular podem ser isolados de uma mistura complexa pelo chromatography da afinidade, phage que expressa os domínios antígeno-ligando específicos para um antígeno particular pode ser isolada selecionando o phage na biblioteca para ligar a esse antígeno. As partículas phage que ligam são recuperadas e usadas infect as bactérias frescas. Cada um phage isolado nesta maneira produzirá uma partícula antígeno-ligando monoclonal analogous a um antibody monoclonal.

Os genes que codificam o local obrigatório do antígeno, que são originais a cada um phage, podem então ser recuperados do DNA phage e ser usados construir genes para uma molécula completa do antibody juntando então às partes dos genes do immunoglobulin que codificam as partes invariant de um antibody. Quando estes genes reconstructed do antibody são introduzidos em uma linha apropriada da pilha de anfitrião, transfected pilhas pode secrete antibodies com todas as características desejáveis de antibodies monoclonal da linha apropriada da pilha de anfitrião.

No muito a mesma maneira que uma coleção do phage pode indicar uma variedade larga de locais antígeno-ligando potenciais, o phage pode também ser projetada para indicar uma variedade larga dos antígenos; tal biblioteca é sabida como uma biblioteca do indicador do antígeno. Nesses casos, o antígeno indicado é frequentemente peptides curtos codificados pelas seqüências quimicamente synthesized do DNA que têm misturas de todos os quatro nucleotides em algumas posições, de modo que todos os aminos-ácido possíveis sejam incorporados. Não é usual para cada posição em um peptide a ser reservado para variar nesta maneira, desde o número de posições variáveis, lá está sobre 2 x 1010 seqüências possíveis de oito aminos-ácido.