ELISA Radioimmunoassay Technique and Theory Tehnica ELISA Radioimmunoassay şi Teoria

ELISA Radioimmunoassays ELISA Radioimmunoassays

Radioimmunoassay (RIA), and enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), and competitive inhibition assay. Radioimmunoassay (RIA), şi-enzimă imunoadsorb ț ie cu anticorpi test (ELISA), inhibarea competitivă şi test.

Radioimmunoassay (RIA) and enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) are direct binding assays for antibody or antigen and both work on the same principle, but the means of detecting specific binding is different. Radioimmunoassays are commonly used to measure the levels of hormones in blood and tissue fluids, while ELISA assays are frequently used in viral diagnostics. For both these methods one needs a pure preparation of a known antigen or antibody, or both, in order to standardize the assay. This assay will be described with a sample of pure antibody, but the principle is similar if pure antigen is used instead. In RIA for an antigen, pure antibody against that antigen is radioactively labeled, usually with 125I; for the ELISA, an enzyme is linked chemically to the antibody. The unlabeled component, which in this case would be antigen, is attached to a solid support, such as the wells of a plastic multiwell plate, which will absorb a certain amount of any protein. Radioimmunoassay (RIA) şi enzima-imunoadsorb ț ie cu anticorpi test (ELISA) sunt direct expertize obligatorii pentru antigen şi anticorp sau de muncă atât pe acelaşi principiu, dar a mijloacelor de detectare specifice obligatorii este diferit. Radioimmunoassays sunt frecvent utilizate pentru a măsura nivelul de hormoni în sângelui şi a fluidelor ţesut, în timp ce ELISA expertize sunt folosite frecvent în virale diagnostice. Pentru ambele aceste metode o pura are nevoie de o pregătire de un cunoscut de antigen sau anticorp, sau ambele, în scopul de a standardizarea test. Acest test va fi descrise cu un eşantion de pur anticorpi, dar principiul este similar, dacă pur de antigen este folosit în loc. În RIA pentru un antigen, pur anticorpi împotriva antigenului de care este etichetat radioactively, de obicei cu 125I; pentru ELISA, o enzimă este legat chimic de anticorpi. unlabeled componentă , Care, în acest caz ar fi de antigen, se anexează la o bază solidă de sprijin, cum ar fi fantanile din plastic multiwell plate, care vor absorbi o anumita suma de o proteină.

The labeled antibody is allowed to bind to the unlabeled antigen, under conditions where nonspecific absorption is blocked, and any unbound antibody and other proteins are washed away. Etichetate de anticorp este permis pentru a obliga la unlabeled de antigen, în condiţiile în cazul în care nonspecific absorbţie este blocată, şi orice unbound anticorpilor şi a altor proteine sunt spălate imediat.

Antibody binding to RIA is measured directly in terms of the amount of radioactivity retained by the coated wells, whereas in Elisa, binding is detected by a reaction that converts a colorless substrate into a colored reaction product. The color change can be read directly in the reaction tray, making data collection very easy, and ELISA also avoids the hazards of radioactivity. This makes ELISA the preferred method for more direct binding assays. Antibody obligatorii pentru RIA este măsurată în termeni de direct, cantitatea de radioactivitate reţinute de către acoperită cu un strat de puturi, întrucât, în Elisa, obligatorii, este detectat de către o reacţie care sa converteasca un substrat colorless colorate intr-un produs de reacţie. Schimbare de culoare pot fi citite direct în Tava de reacţie, astfel, foarte uşor de colectare a datelor, de asemenea, ELISA şi evită riscurile de radioactivitate. Aceasta face ELISA metoda preferată pentru mai multe directe expertize obligatorii.

Labeled anti-immunoglobulin anti-bodies can also be used in RIA or ELISA to detect binding of unlabeled antibody to unlabeled antigen-coated plates. In this case, the labeled anti-immunoglobulin antibody is used in what is termed a ‘second layer’. The use of a second layer also amplifies the signal, as at least two molecules of the labeled anti-immunoglobin antibody are able to bind to each unlabeled antibody. RIA and ELISA can also be carried out with unlabelled antibody stuck on the plates and labeled antigen added. Etichetate anti-immunoglobulin anti-organisme pot fi de asemenea folosite în RIA sau ELISA pentru a detecta anticorpi unlabeled obligatorii de la unlabeled-coated antigen de placi. În acest caz, etichetate immunoglobulin anti-anticorp este utilizat în ceea ce se numeşte un "al doilea strat". Folosirea unui al doilea strat de asemenea, amplifies de semnal, ca cel puţin două molecule de etichetat anti-immunoglobin anticorpi sunt capabili să se leagă de fiecare unlabeled anticorp. RIA si ELISA poate fi de asemenea efectuate cu anticorpi unlabelled stuck pe platouri şi etichetate cu antigen adăugată.

Figure: The principle of the enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) Figura: Principiul de enzima imunoadsorb ț ie cu anticorpi test (ELISA)

elisa

To detect antigen A, purified antibody specific for antigen A is linked chemically to an enzyme. The samples to be tested are coated onto the surface of plastic wells to which they bind nonspecifically. Pentru a detecta antigenul A, purificat de antigen anticorp specifice pentru A se legate chimic de o enzimă. Probele sunt testate pentru a fi acoperită cu un strat de pe suprafata de puţuri de plastic la care se obliga nonspecifically. Residual sticky sites on the plastic are blocked by adding irrelevant proteins (not shown). The labeled antibody is then added to the wells under conditions where non specific binding Reziduala lipicios de pe site-urile din material plastic sunt blocate prin adăugarea de proteine irelevante (nu este arătat). Etichetate anticorp este apoi adaugă la fântâni, în condiţii specifice, în cazul în care nu sunt obligatorii