Радиоиммуноанализы ELISA

Авторское право 2006 - AntibodyStation.

Радиоиммуноанализ (RIA), и энзим-соединенный assay иммуносорбента (ELISA), и конкурсный assay ингибитирования.

Радиоиммуноанализ (RIA) и энзим-соединенный assay иммуносорбента (ELISA) сразу binding assays для антитела или антигена и обоими работают на таком же принципе, но середины обнаруживать специфически вязку друг.  Радиоиммуноанализы общ использованы для того чтобы измерить уровни инкретей в крови и жидкостях ткани, пока assays ELISA част использованы в вирусной диагностике.  KAK для этих методов одно чисто подготовка знанного антигена TAK I для антитела, или обоих, для того чтобы унифицировать assay.  Этот assay будет описан с образцом чисто антитела, но принцип подобен если чисто антиген использован вместо.  В RIA для антигена, чисто антитело против того антигена радиоактивно обозначено, обычно с 125I; для ELISA, энзим соединен химически к антителу.  Немеченым компонентом, который in this case был бы антиген, прикреплен к твердой поддержке, such as добра пластичной плиты multiwell, которая поглотит некоторое количество любого протеина.  

Обозначенное антитело позволено связать к немеченому антигену, под условиями где неспецифичная абсорбциа прегражена, и любое unbound антитело и другие протеины помыты прочь.

Антитело связывая к RIA измерено сразу in terms of количество радиоактивности сохраненное coated добрами, тогда как в Elisa, связывая обнаружено реакцией которая преобразовывает бесцветный субстрат в покрашенный продукт реакции.  Изменение цвета можно прочитать сразу в подносе реакции, делающ собрание данных очень легким, и ELISA также избегает опасностей радиоактивности.  Это делает ELISA предпочитаемый метод для больше сразу binding assays.

Обозначенные антитела anti-иммуноглобулина можно также использовать в RIA или ELISA для того чтобы обнаружить вязку немеченого антитела к немеченым антиген-coated плитам.  In this case, обозначенное антитело anti-иммуноглобулина использовано в термин слоем `вторым'.  Польза второго слоя также усиливает сигнал, по мере того как по крайней мере 2 молекулы обозначенного антитела anti-immunoglobin могут связать к каждому немеченому антителу.  RIA и ELISA можно также унести при немеченое антитело вставленное на добавленных плитах и обозначенном антигене.

Рисунок:  Принцип энзима соединил assay иммуносорбента (ELISA)

Для того чтобы обнаружить антиген a, очищенное специфический антитела для антигена a соединено химически к энзиму.  Образцы, котор нужно испытать coated на поверхность пластичных добр к они связывают nonspecifically. Остаточные липкие места на пластмассе прегражены путем добавлять нерелевантные показанные протеины ().  Обозначенное антитело после этого добавлено к добрам под условиями где неспецифичная вязка  

Авторское право 2006 до 2007 - AntibodyStation.