Affinity Chromatography - Antibodies Affinitetskromatografi - Antikroppar

Affinity Chromatography of Antibodies Affinitetskromatografi av antikroppar

Purification of Antibody using Affinity Methods Rening av antikroppar med hjälp Affinity Methods

Specific antibody can be isolated from an antiserum. Affinity Chromatography separates molecules on their differing affinities for a ligand. Specifik antikropp kan isoleras från ett antiserum. Affinitetskromatografi separerar molekyler på sina olika tillhörighet till en ligand.

This method exploits the specific binding of antibody to antigen held on a solid matrix. Antigen is bound covalently to small, chemically reactive beads, which are loaded into a column, and the antiserum is allowed to pass over the beads. Denna metod utnyttjar specifik bindning av antikroppar mot antigen hållas på en fast matris. Antigen är kovalent bundna till små, kemiskt reaktiva granula, som är laddad i en kolumn, och antiserum tillåts passera över kulor. The specific antibodies bind, while all the other proteins in the serum, including the antibodies to other substances, can be washed away. De specifika antikroppar som binder, medan alla andra proteiner i serum, inklusive antikroppar mot andra ämnen, kan tvättas bort.

The specific antibodies are then eluted, typically by lowering the pH to 2.5 or raising it to greater than 11. Antibodies bind stably under physiological conditions of salt concentration, temperature, and pH, but the binding is reversible as the bonds are noncovalent. De specifika antikroppar är sedan elueras, vanligen genom att sänka pH till 2,5 eller höja det till större än 11. Antikroppar som binder stabilt under fysiologiska förhållanden salt koncentration, temperatur, pH, men bindningen är reversibel som obligationer är noncovalent.

Affinity chromatography can also be used to purify antigens from complex mixtures by using beads coated with specific antibody. Affinity chromatography kan också användas för att rena antigener från komplicerade blandningar med granula belagda med specifika antikroppar.

Affinity chromatography uses antigen-antibody binding to purify antigens or antibodies. To purify a specific antigen from a complex mixture of molecules, a monoclonal antibody is attached to an insoluble matrix, such as chromatography beads, and the mixture of molecules is passed over the matrix. Affinity chromatography använder antigen-antikropp bindande rena antigener eller antikroppar. Rena ett specifikt antigen från en komplex blandning av molekyler, en monoklonal antikropp är knuten till ett olösligt matris, t.ex. kromatografi kulor, och blandningen av molekyler är förbigås matrisen .

The specific antibody binds the antigen of interest; other molecules are washed away. De specifika antikroppar binder antigenet av intresse, andra molekyler tvättas bort.

Specific antigen is then eluted by altering the pH, which can usually disrupt antibody-antigen bonds. Specific antigen är sedan elueras genom att ändra pH-värdet, vilket vanligtvis kan störa antibody-antigen obligationer.

Antibodies can be purified in the same way on beads coupled to antigen. Antikroppar kan renas på samma sätt i granula kopplas till antigen.

affinitetskromatografi antikropp