Immunofluorescence Microscopy Technique and Theory Immunofluorescens Microscopy Teknik och Teori

Immunofluorescence Microscopy Immunofluorescens Microscopy

Learn About Immunofluorescence Microscopy Läs mer om Immunofluorescens Microscopy

Antibodies bind stably and specifically to their corresponding antigen, they are invaluable as probes for identifying a particular molecule in cells, tissues, or tissues, or biological fluids. Antibody molecules can be used to locate their target molecules accurately in single cells or in tissue sections by a variety of different labeling techniques. When the antibody itself, or the antiimmunoglobulin antibody used to detect it is labeled with a fluorescent dye the technique is known as immunoflurescence microscopy. As in all serological techniques, the antibody binds stably to its antigen, allowing unbound antibody to be removed by thorough washing. As antibodies to proteins recognize the surface features of the native, folded protein the native structure of the protein being sought usually needs to be preserved, either by using frozen tissue sections that are fixed only after the antibody reaction has been performed. Some antibodies, however, bind proteins even if they are denatured, and such antibodies will bind specifically even to protein in fixed tissue sections. Antikropparna binder stabilt och särskilt till deras motsvarande antigen, de är ovärderliga som sonder för att identifiera en viss molekyl i celler, vävnader eller vävnader, eller biologiska vätskor. Antibody molekyler kan användas för att lokalisera sina målmolekyler exakt i enskilda celler eller vävnadsprov genom en rad olika etiketteknik. När antikroppen själv, eller antiimmunoglobulin antikropp används för att upptäcka den är märkt med en fluorescerande dye tekniken kallas immunoflurescence mikroskopi. Som i alla serologiska tekniker, antikroppen binder stabilt för att det antigen som gör obundna antikropp som skall avlägsnas genom noggrann rengöring. antikroppar mot proteiner som känner igen ytan detaljer av infödda, vikt protein det ursprungliga struktur av proteinet som eftersträvas oftast måste bevaras, antingen genom att använda fryst vävnadsprov som har åtgärdats först efter antikroppar Reaktionen har utförts. Vissa antikroppar dock bindande proteiner även om de är denaturerad, och dessa antikroppar binder specifikt till och med protein i fasta vävnadsprov.

The fluorescent dye can be covalently attached directly to the specific antibody, but more commonly, the bound antibody is detected by fluorescent anti-immunoglobulin, a technique known as indirect immunofluorescence. The dyes chosen for immunofluroscence are exited by light of one wavelength, usually blue or green, and emit light of a different wavelength in the visible spectrum. The most common fluorescent dyes are fluorescein, which emitsgreen light, Texas Red and Peridinn chlorophyll protein (PerCP), which emit red light, and rhodamine and phycoerythrin (PE) which emit orange/red light. By using selective filters, only the light coming from the dye or flurochrome used is detected in the fluorescence microscope. This technique can be used to detect the distribution of any protein. By attaching different dyes to different antibodies, the distribution of two or more molecules can be determined in the same cell or tissue section. Den fluorescerande dye kan kovalent knytas direkt till specifik antikropp, utan mer allmänt, den bundna antikroppar påvisas med fluorescerande anti-immunoglobulin, en teknik som kallas indirekt immunofluorescens. Färgämnen som valts för immunofluroscence är avslutade med tanke på en våglängd, vanligen blå eller grönt, och avger ljus av olika våglängder i det synliga spektrumet. Vanligast fluorescerande färger är fluorescein, som emitsgreen ljus, Texas Red och Peridinn klorofyll protein (PerCP), som avger rött ljus, och rhodamine och fykoerytrin (PE) som avger orange / röd lampa. Genom att använda selektiva filter, bara ljuset som kommer från färgen eller flurochrome används upptäcks i fluorescens-mikroskop. Tekniken kan användas för att upptäcka distribution av proteiner. genom att koppla ihop olika färger till olika antikroppar, distribution av två eller flera molekyler kan bestämmas i samma celler eller vävnader.

The recent development of the confocal fluorescent microscope, which uses computer-aided techniques to produce an ultrathin optical section of a cell or tissue, gives very high resolution immunofluorescence microscopy without the need for elaborate sample preparation. The resolution of the confocal microscope can be further increased using low-intensity illumination so that two photons are required to excite the flurochrome. A pulsed laser beam is used, and only when it is focused into the focal plane of the microscopeis the intensity sufficient to excite fluorescence. In this way the fluorescence emission itself can be restricted to the optical section. Den senaste utvecklingen av confocal fluorescensmikroskop, som använder datorstödd teknik för att producera en ultrathin optisk avsnitt i en cell eller vävnad, ger mycket hög upplösning immunofluorescens mikroskopi utan att behöva utarbeta provpreparering. Upplösningen på confocal mikroskop kan ytterligare ökas med hjälp av låg intensitet belysning så att två fotoner är skyldiga att uppvigla de flurochrome. Pulserande laserstråle används, och endast när det är fokuserat till focal plane av microscopeis intensiteten tillräckligt för att uppvigla fluorescens. På detta sätt fluorescence emission själv kan begränsas till den optiska delen.

One important development in the area of microscopy has been the use of time-lapse video microscopy, in which sensitive digital video cameras record the movement of fluorescently labeled molecules in cell membranes and their redistribution when cells come into contact with each other. Cell-surface molecules can be fluorescently labeled in two main ways. One is by the binding of flurochrome-labeled Fab fragments of antibodies specific for the protein of intrest; the other is by generating a fusion protein, in which the protein of intrest has been attached to one of a family of florescent proteins obtained from jellyfish like GFP. The list of available fluorescent labels now includes red, blue, cyan or yellw fluorescent proteins. En viktig utveckling på området microscopy har användningen av tid förfaller video microscopy, där känsliga digitala videokameror registrera flödet av fluorescently märkta molekyler i cellens membran och deras omfördelning när celler komma i kontakt med varandra. Cellernas ytor molekyler kan fluorescently heter i två huvudsakliga sätt. Det ena är genom bindning av flurochrome-märkt Fab fragment av antikroppar specifika för det protein av intresse, det andra är genom att generera en fusion protein, där proteinet av intresse har varit knuten till en av en familj av fluorescerande protein som erhållits från maneter gillar god jordbrukarsed. listan över tillgängliga fluorescerande etiketter innehåller nu rött, blått, cyan eller yellw fluorescerande protein.