Phage Display Libraries for Antibody Technique and Theory Phage Display bibliotek För Antibody Technique och teori

Phage Display Libraries for Antibody V-region Production Phage Display bibliotek För Antibody V-regionen Produktion

Phage Display Library - Antibody Production Phage Display Bibliotek - Antibody Production

This technique is used for producing antibody-like molecules. Gene segments encoding the antigen-binding variable of V domains of antibodies are fused to genes encoding the coat protein of a bacteriophage. Bacteriophage containing such gene fusions are used to infect bacteria, and the resulting phage particles have coats that express the antibody-like fusion protein, with the antigen-binding domain displayed on the outside of the bateriophage. Denna teknik används för att producera antikroppar-liknande molekyler. Gene segment kodning av antigen-bindande variabel för V domäner av antikroppar är smält att gener kodar för coat protein av en bakteriofag. Bakteriofag innehåller sådan gen fusioner används för att infektera bakterier, och den resulterande phage partiklar har rockar att uttrycka antikropp-liknande fusion protein, med antigen-bindande domän visas på utsidan av bateriophage.

A collection of recombinant phage, each displaying a different antigen-binding domain on its surface, is known as a phage display library. In much the same way that antibodies specific for a particular antigen can be isolated from a complex mixture by affinity chromatography, phage expressing antigen-binding domains specific for a particular antigen can be isolated by selecting the phage in the library for binding to that antigen. The phage particles that bind are recovered and used to infect fresh bacteria. Each phage isolated in this way will produce a monoclonal antigen-binding particle analogous to a monoclonal antibody. En samling av rekombinant phage, varje visning av en annan antigen-bindande domän på dess yta, är känd som en phage display biblioteket. I ungefär samma sätt som antikroppar specifika för en viss antigen kan isoleras från en komplex blandning av affinitetskromatografi, phage uttrycker antigen-bindande domäner specifika för en viss antigen kan isoleras genom att välja phage i biblioteket för att binda till att antigen. phage partiklar som binder återvinns och används till infektera färska bakterier. Varje phage isolerade på detta sätt kommer att producera en monoklonal antigen-binding partikel jämförbar med en monoklonal antikropp.

The genes encoding the antigen binding site, which are unique to each phage, can then be recovered from the phage DNA and used to construct genes for a complete antibody molecule by joining then to parts of immunoglobulin genes that encode the invariant parts of the an antibody. When these reconstructed antibody genes are introduced into a suitable host cell line, the transfected cells can secrete antibodies with all the desirable characteristics of monoclonal antibodies of the suitable host cell line. De gener som kodar för antigen bindande webbplats, som är unika för varje phage, sedan kan återkrävas från phage DNA och används för att konstruera gener för en komplett antikropp molekyl som ansluter sedan till delar av immunglobulin gener som kodar för invariant delar av en antikropp . När dessa rekonstruerade antikropp gener förs in en lämplig värd cellinje, transfekterade celler kan utsöndra antikroppar med alla de egenskaper de monoklonala antikroppar av lämplig värd cellinje.

In much the same way that a collection of phage can display a wide variety of potential antigen-binding sites, the phage can also be engineered to display a wide variety of antigens; such a library is known as an antigen display library. In such cases, the antigen displayed are often short peptides encoded by chemically synthesized DNA sequences that have mixtures of all four nucleotides in some positions, so that all possible amino acids are incorporated. It is not usual for every position in a peptide to be allowed to vary in this way, since the number of variable positions, there are over 2 x 1010 possible sequences of eight amino acids. På ungefär samma sätt som en samling phage kan visa ett brett spektrum av potentiella antigen-binding sites, phage kan också vara konstruerad för att visa ett brett utbud av antigener; ett sådant bibliotek är känt som ett antigen visa biblioteket. I sådana fall Den antigen som visas är ofta korta peptider kodas av kemiskt syntetiserade DNA-sekvenser som har en blandning av alla fyra nukleotider i vissa lägen, så att alla möjliga aminosyror ingår. Det är inte vanligt att varje position i en peptid som skall tillåtas att variera i detta sätt, eftersom antalet variabla lägen finns det över 2 x 1010 möjliga sekvenser på åtta aminosyror.